首页 / 试剂 / 核酸纯化 / PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

收藏

PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

丁香通采购保障计划,让您的采购更放心。 查看详情

  • 商家诚信度 
  • 入驻年限  5年
  • 广州市天河区燕岭路89燕侨大厦912

站内推广

  • 货号: N1093
    供应商: 东盛生物
    数量: 大量
    保质期: 2年
    保存条件: 室温
    规格: 200次

    PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

     

     

    货号

    规格

    价格

    N1091

    50次

    280

    N1092

    100次

    510

    N1093

    200次

    945

     

     

    产品组分

     

    组分

    货号

    N1091

    N1092

    N1093

    溶液BD

    20 ml

    40 ml

    80 ml

    溶液PE

    15 ml

    15 ml×2

    20 ml×3

    溶液Eluent

    2.5 ml

    5 ml

    10 ml

    DNA纯化柱

     50个

     100个

     200个

    说明书

    1份

    1份

    1份

     

    注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

            溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

           上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

     

    保存条件

    室温保存2年。

     

    产品说明

    本产品采用传统的硅胶柱膜吸附技术,用于从PCR或其他各种酶促反应液中纯化DNA片段(50 bp-40 kb)。其纯化原理是硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA

    片段(高盐、低pH值),同时去除酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,被吸附的DNA再在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度DNA

    片段,此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

     

    产品特点

    • 回收片段范围广:50 bp-40 kb。
    • 高效:回收率大于85%。
    • 高纯度:OD260/OD280 = 1.7-1.9。产物不含酶蛋白、核酸引物、dNTP。无须再纯化,可直接使用。
    • 快速:15min完成实验。

     

    产品用途

    • 常规限制性酶切
    • PCR扩增
    • 转化
    • DNA序列测定
    • 体外转录

     

    质量控制

    从PCR扩增产物中纯化50 bp和1000 bp的DNA片段。

     

    PCR产物纯化流程图

    图1  PCR产物纯化流程图

     

    操作方法

    1  确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中,向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。

    2  将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。

    3  12,000 rpm离心1min,弃滤液。

       注:此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

               若溶液体积大于纯化柱容积(800 μl),可分两次离心。

    4  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

       注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

               此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,以获得高质量DNA片段。

    5  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

    6  12,000 rpm 离心 3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

       注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

    7  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA

    片段。贮存于-20℃。

       注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

              对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA目的片段的产量。

     

    图2  PCR产物纯化电泳图

     

     

     

     注意事项

    1  本试剂盒适用于无选择性的回收体系中所有的DNA 片段。如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,建议选择凝胶回收试剂盒。

    2  本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。如果DNA浓度小,或DNA初始量少,回收率将会偏低。

    3  所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm(约13,400×g)。

    4 溶液 Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

     

    DNA 浓度及纯度检测

    1  回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链

    DNA。

    2  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

    温馨提示:不可用于临床治疗。

    资料下载:

    (N1091-N1093)PCR产物及DNA片段纯化试剂盒.pdf 附件下载 (下载 7 次)

询价发送成功

会在1个工作日内联系您!

马上登录注册,即可保存询价历史

你可能感兴趣的产品