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DNA凝胶回收试剂盒

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DNA凝胶回收试剂盒

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  • 货号: N1071
    供应商: 东盛生物
    保存条件: 室温保存2年
    数量: 大量
    保质期: 室温保存2年
    规格: 50次

    DNA凝胶回收试剂盒

     

     

    货号

    规格

    价格

    N1071

    50次

    240

    N1072

    100次

    440

    N1073

    200次

    820

     

     

    产品组分

     

    组分

    货号

    N1071

    N1072

    N1073

    溶液BD

    20ml

    40 ml

    80 ml

    溶液PE

    15 ml

    15 ml×2

    20 ml×3

    溶液Eluent

    2.5 ml

    5ml

    10 ml

    DNA纯化柱

     50个

     100个

     200个

    说明书

    1份

    1份

    1份

     

    注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

    溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

    上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

     

    保存条件

    室温保存2年。

     

    产品说明

    本产品采用了经典的硅胶膜技术,用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段(50 bp-40 kb)。其纯化原理是含有目的片段的琼脂糖凝胶溶解后,硅胶膜柱高

    可逆地吸附体系中的DNA片段(高盐、低pH值),蛋白及其它杂质不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg

    高纯度DNA片段,此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

     

    产品特点

    • 回收片段范围广:50 bp-40 kb。
    • 高效:回收率大于85%。
    • 高纯度:OD260/OD280=1.8-2.0。无须再酚/氯*仿抽提纯化,可直接使用。
    • 快速:15min完成实验。

     

    产品用途

    • 常规限制性酶切
    • PCR扩增
    • 转化
    • DNA序列测定
    • 体外转录

     

    质量控制

    从1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp、1,000 bp、10,000 bp的DNA片段。

     

    DNA凝胶回收流程图

    图1  DNA凝胶回收流程图

     

    操作方法

    1  切取含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶条带。

       注:尽量切除不含有目的DNA部分的凝胶,减少凝胶体积,提高DNA回收率。

               切胶时,请使用长波长UV(360 nm)光盒。且不要将DNA长时间暴露在紫外灯下,以防DNA损伤。

    2  称取凝胶的重量近似地确定其体积。

       注:凝胶重量的称量方法:取1.5 ml离心管电子天平称初质量,切胶装在离心管后称终质量,两者差即为胶的质量。不同厂家离心管的重量可能有差异,因此,每个离心管

    的重量需单独称量。

    3  按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 µl溶液BD的比例,向离心管中加入溶液BD。

    4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝胶完全溶化。期间需要振荡混合3次。

       注:琼脂糖必须完全融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA片段的回收效率。

               如果总体积大于500 µl,可适当增加溶胶时间。

               若此时溶液变红,可加10 µl 3M NaAC(pH 5.2)。

    5  将步骤4所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。

       注:胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在较高温度时结合DNA 的能力较弱。

    6  12,000 rpm离心1min。若溶液量大于DNA纯化柱的容积,可分两次离心,弃滤液。

       注:此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

    7  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

       注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

              此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱,以获得高质量DNA片段。

    8  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

    9  12,000 rpm离心 3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

       注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

    10 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA

    片段。贮存于-20℃。

       注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

       对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA目的片段的产量。

     

    图2  切胶回收DNA片段电泳图

     

    说明:使用5μg DL5000进行1%琼脂糖电泳。切出各条DNA片段后,使用本试剂盒逐一回收DNA片段。其结果如图2所示,所获DNA片段纯度高,回收率大于

    70%。

     

    注意事项

    1  电泳时请使用新鲜配制的TAE或TBE电泳缓冲液,以免影响电泳及回收效果。

    2  本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。如果DNA浓度小,或DNA初始量少,回收率将会偏低。

     

    DNA 浓度及纯度检测

    1  回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链

    DNA。

    2  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

    3  所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm(约13,400×g)。

    4 溶液 Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

    温馨提示:不可用于临床治疗。

    资料下载:

    (N1071-N1073)DNA凝胶回收试剂盒.pdf 附件下载 (下载 5 次)

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