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Taq DNA聚合酶

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Taq DNA聚合酶

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  • 货号: P1012
    数量: 大量
    供应商: 东盛生物
    保存条件: 请置于-20 ℃ 。
    规格: 500 U
    Taq DNA聚合酶

     

     

    货号

    规格(U)

    价格

    P1011

    500

    150

    P1012*

    500

    190

    P1013

    1,000

    270

    P1014*

    1,000

    350

    P1015

    12,000

    2900

    注:1 P1011~P1014产品包装中均提供6×上样缓冲液。

           2 *标识制品中附带dNTP混合物。

     

    产品组分

    P1011

    Taq DNA聚合酶  5 U/μl              100 μl

    10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)    1.25 ml

    6×Loading Buffer                         1 ml

    P1012

    Taq DNA聚合酶  5 U/μl                 100 μl

    10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)      1.25 ml

    dNTPs(各2.5 mM)                   1 ml

    6×Loading Buffer                         1 ml

     P1013

    Taq DNA聚合酶  5 U/μl                200 μl

    10×PCR Buffer(Mg2+Plus)      1.25 ml×2

    6×Loading Buffer                        1 ml×2

    P1014

    Taq DNA聚合酶  5 U/μl                200 μl

    10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)     1.25 ml×2

    dNTPs(各2.5 mM)                  1 ml×2

    6×Loading Buffer                        1 ml

    P1015

    Taq DNA聚合酶  5 U/μl           100 μl×24

    10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)  1.4 ml×24

     

    注:1  Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装,可自由选择,如没特别说明提供5 U/μl的包装。

     

            2  10×PCR Buffer分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装,可方便选择。如没特别说明提供10×PCR Buffer(Mg2+ Plus)。Mg2+ Free的 10×PCR Buffer提供25 mM MgCl2

     

    保存条件

    -20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。

     

    产品说明

      Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为

    0.9~1.2 kb/ min(70~75℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA。

     

    产品特点

    热稳定性好:95℃下半衰期超过40 min。

    PCR产物具有3’-dA,可直接用于T/A克隆。

     

    产品用途

    常规PCR扩增

    DNA标记

    DNA测序

    制备TA克隆用PCR产物

     

    活性定义

        一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

     

    质量控制

        相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,

    扩增活性无明显改变。

     

    10×PCR Buffer

      500 mM KCl

      100 mM Tris-Cl

      15 mM MgCl2

      1% Triton-100

     

    酶贮存液

      20mM Tris-HCl

      1mM DTT

      0.1mM EDTA

      100mM KCl

      50 % Glycerol

      1% Triton-100

     

    应用举例

    注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

     

    以λDNA为模板,扩增1kb片段。

    λ DNA(2.5 ng/μl)            1 μl       

    引物1 (10 μM)               2 μl

    引物2 (10 μM)             2 μl

    10×PCR  Buffer                       5 μl

    dNTPs(2.5 mM)                           4 μl

    Taq(5 U/μl)                      0.25 μl

    超纯水                     补足至50 μl

     

    PCR反应条件

    95℃           3 min

    95℃           30 sec

    55~68℃     30 sec    30 Cycles

    72℃          1 min

    72℃          10 min

     

     

    注意事项

    1  Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3’末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。

    2   碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5

    3   建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。

    4  模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)

        人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg

        λDNA                 0.5 ng---5 ng

        质粒DNA             0.1 ng-10 ng

        大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng

    5  如进行PCR扩增后,除目的条带外,还伴随其他杂带,建议适当减少体系中的Taq酶用量,以增加PCR扩增反应的特异性。

     

    Q&A

    问:东盛Taq DNA聚合酶与国外品牌的Taq DNA聚合酶有什么区别?

    答:东盛Taq DNA聚合酶的活性比较稳定,其品质与国外知名公司的产品差异不大。但因酶活性的复杂性,批间产品可能会有差异。在PCR实验过程中,如PCR

    扩增产物变淡或无,可适当增加酶的用量;如发现有较强的非特异性扩增,那可减少酶的用量。

     

    问:不同批次的Taq DNA聚合酶的活性有没有差异?

    答:有一定的差异。为解决这一问题,东盛已经通过Taq DNA聚合酶的规模化生产,减少生产批次,实现产品品质的均一性。

     

    问:如何利用Taq DNA聚合酶进行加A反应?

    答:由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl;

        加入1μl Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl2);

        加入dATP 至终浓度0.2 mM;

        加入5 U的Taq DNA 聚合酶;

        加超纯水至终反应体积为10μl;

        70℃孵育15-30 分钟;

        进行TA克隆。

     

    温馨提示:不可用于临床治疗。

    资料下载:

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