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- 技术资料
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39
- 英文名：
ATTO 532
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
1mg 5mg 100mg
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称: ATTO 532
英文名称 ATTO 532
规格: 1mg 5mg 100mg
分类 PCR荧光核酸试剂
下面就向大家介绍实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
PCR实验步骤
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
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二氢二醇脱氢酶 英文名称： Human Dihydrodiol Dehydrogenas 2 规格： 48T/96T 英文缩写： DDH2 3β-Hydroxyporiferast-5-en-7-one 145163-97-9 中文名： 分子式：C29H48O2
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二0酸核糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）试剂盒 紫外分光光度法 25管/24样 4,9-Dihydroxy-α-lapachone 中文名： 分子式：C15H14O5 度：98.0%
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Rebeprazole 中文名：雷贝拉唑钠 分子式：C18H20N3NaO3S 度：98.0% 小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)ELISAKit ELISA. 96T/48T
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1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称: ATTO 532
英文名称 ATTO 532
规格: 1mg 5mg 100mg
分类 PCR荧光核酸试剂
下面就向大家介绍实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下是ATTO 532的相关产品：
Stauntosaponin A 1417887-91-2 中文名： 分子式：C28H38O7 度：97.0% 关键词： 小鼠(NO)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Stanozolol 1
Stanolone 521-18-6 中文名：雄诺龙 分子式：C19H30O2 度：98.0% 关键词： 小鼠补体蛋白3(C3)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Sprengerinin C 88861-91-0 中文名： 分子式：C44H70O16 度：98.0% 关键词： 抗肿瘤; 麦冬; 螺甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠叠氮胸苷(AZT)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Sprengerinin A 88866-99-3 中文名： 分子式：C38H60O12 度：% 关键词： 麦冬; 螺甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠氧化型谷胱甘肽elisa试剂盒 小鼠氧化型谷胱甘肽试剂盒 规格型号：96T/48T 小鼠氧化型谷胱甘肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠氧化型谷胱甘肽试剂盒、小鼠氧化型谷胱甘肽elisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。
戊二 (50%) 100ml Anthraglycoside B 中文名：大黄素-8-O-葡萄糖苷 分子式：C21H20O10 度：97.5%
戊二 (25%) 100ml Anthraquinone 84-65-1 中文名：蒽醌 分子式：C14H8O2 度：98.0% 关键词：
五羟色胺 (Serotonin/5-HT) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Anthraglycoside B 23313-21-5 中文名：大黄素-8-O-葡萄糖苷 分子式：C21H20O10 度：97.5% 关键词：
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二氢二醇脱氢酶 英文名称： Human Dihydrodiol Dehydrogenas 2 规格： 48T/96T 英文缩写： DDH2 3β-Hydroxyporiferast-5-en-7-one 145163-97-9 中文名： 分子式：C29H48O2
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二0酸核糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）试剂盒 紫外分光光度法 25管/24样 4,9-Dihydroxy-α-lapachone 中文名： 分子式：C15H14O5 度：98.0%
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Rebeprazole 中文名：雷贝拉唑钠 分子式：C18H20N3NaO3S 度：98.0% 小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)ELISAKit ELISA. 96T/48T
4-Aza-5androstan-1-ene- 3-one-17carboxylic acid 中文名： 分子式：C19H27NO3 度：98.0% 小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)ELISAKit ELISA. 96T/48T
2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid 中文名： 分子式：C19H28INO3 度：98.0% 小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Lonidamine 中文名：氯尼达明 分子式：C15H10Cl2N2O2 度：98.0% 小鼠CD34(mouse CD34) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装
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