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微生物分子生物学鉴定
成都罗宁生物科技有限公司
分子生物学鉴定
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1. 微生物16S/18S/ITS全长菌种鉴定
16S rDNA是编码原核生物核糖体小亚基rRNA(16S rRNA)的基因。长度约为1500pb,是细菌分类学研究中最常用、最有用的"分子钟16S rRNA其大小在1,500 bp左右,所代表的信息量适中,因此是进行分类研究的理想材料。利用16S rDNA两端的引物PCR扩增未知菌株的16S rRNA基因,并进行DNA测序,与GenBank中的已知序列进行同源性比较后,判定细菌种类,将细菌划分到属或种。
18S rDNA是编码真核生物核糖体小亚基rRNA的基因序列,序列中既有保守区又有可变区,保守序列区域反映了生物物种间的亲缘关系,而高变序列区域则能体现物种间的差异。由于18S rDNA在进化速率上比较保守,因此在系统发育研究中较适用于种以上的分类。转录间隔区ITS位于核糖体rDNA 18S、5.8S及28S之间,在进化过程中能够承受更多的变异,其进化速率为18S rDNA的10倍,属于中度保守的区域,利用它可研究种及种以下的分类。
2、多位点分析
多位点分析基于多个看家基因的保守性而建立系统分析方法,有利于弥补16S rRNA基因序列分析由于信息量不够而导致的错误。
3、DNA/DNA杂交
通过热变性法测定两株菌株之间的DNA/DNA杂交率,从而判断两者之间的亲缘关系。
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