【问题讨论】 Q1:什么是质粒的转化效率? A1:转化效率定义为转化1µg质粒到一定体积的感受态细胞中,所能形成的菌落的数量(clone formation unit,cfu)。但实际上,由于用于测定转染效率的质粒的分子量不同,每微克DNA所代表的DNA分子数也会有差异,因此一般情况下,转化效率测定使用的都是pBR322或pUC19等小分子量的质粒。擎科采用pUC19对转化效率进行测定。 取0.1 ng pUC19 Plasmid DNA加入至100µL的感受态细胞中进行转化,再加入900µL的SOC培养基(0.1 ng DNA/mL),将上述培养液稀释10倍后(0.01 ng DNA/mL)取100µL涂布平板(0.001 ng DNA/100µL),记录菌落数。以得到200个克隆体为例计算转化效率,此时的转化效率=200 cfu/0.001 ng=2×105cfu/ng=2×108cfu/µg pUC19 DNA。