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HEPES解离液
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HEPES Isolation Buffer
一年
上海泽叶生物科技有限公司
-20℃
100ml
中文名:HEPES解离液
英文名:HEPES Isolation Buffer
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:-20℃
植物的核DNA含量和倍性水平是植物学研究中重要的基础研究指标。流式细胞术的应用,提高了植物核DNA含量检测的准确度和检测速度。只通过物理方法即切碎叶片往往不能获取大量完整的细胞核,还需加入特定的解离液,使植物细胞破碎,分散细胞器,进而解离出细胞核。同时解离液还可以防止细胞间相互粘连,抵消次生代谢物带来的消极影响,并维持一定的渗透压,保证细胞核的完整性。 产品说明:(使用举例)Otto两步法:1. 分别取内标植物和黄芩叶片约1cm2放到培养皿中,加入4℃保存备用的OttoⅠ提取液1mL,用锋利的单刃刀片垂直快速切碎叶片;2. 混匀后用枪头吸取提取液经30um的滤头过滤到1.5mL的离心管中,4℃、1000g离心5min,小心吸弃上清;3. 加入500uL Otto II溶液(临用前加入0.02mg/mL RNase A+0.02mg/mL PI)备用。LB01一步法(其他解离液参照此解离步骤):1. 同两步法取材后,加入分装解冻后的LB01提取液1mL,快速切碎和过滤得细胞核悬液;2.在上机测试前约5min,每管加入20uL的RNase储存液(1mg/mL)和20uL的PI储存液(1mg/mL)。 注意:上述操作中,刀片要锋利,材料要浸入提取液,垂直快速切碎,解冻的PI和加入PI的细胞核悬液,均需要冰上低温避光保存,每个样品需要3个重复。荧光染料选择: Hoechst 33342,Hoechst 33258和DAPI属于非嵌入式染料,主要结合在DNA的A-T碱基区,因此此类染料不适合于检测基因组绝对值,实际测量值偏小。但是可以获得高分辨率的柱状图,可以用于倍性水平检测。PI,EB,AO为嵌入式染料,在检测核DNA的含量前,需要先降解RNA,排除双链RNA的干扰,此类染料只能染死细胞,也可以用来区分活死细胞。特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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