核酸内切酶IV ,又叫Nfo,来源于E.coli,参与DNA损伤修复。该酶可识别双链DNA分子上的脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点,并切割 AP 位点 5´ 端的第一个磷酸二酯键,产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端;另外,核酸内切酶IV还具有3´二酯酶活性,能从 DNA 的 3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸该酶还具有3´-5´的外切酶活性,该酶对底物的渐进式作用受到金属离子、DTT、EDTA等的影响,且更倾向于作用于3´凹末端的双链DNA。
组分
名称
数量
Endonuclease IV (10 U/μl)
100 μl/500 μl
10X Endonuclease IV Buffer
1 ml/1 ml×5
应用
单细胞凝胶电泳
DNA损伤和修复研究
SNP分析
单位定义
在1×Endonuclease IV Buffer (100 mM NaCl,50 mM Tris-HCl(pH 7.9),10 mM MgCl2,1 mM DTT)中,10μl反应体系内, 37°C反应1h,能切割 1 pmol 含一个 AP 位点的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量定义为一个活性单位。
酶储存液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.