使用说明: 1. 融解本产品并适当混匀,置于冰浴备用。 2. 细胞的裂解和样品的收集: a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液。
器皿类型
96孔板
48孔板
24孔板
12孔板
6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔)
100
150
200
300
500
注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100μl。 b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于海肾萤光素酶报告基因检测。 注1:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。 注2:制备的样品也可以用BCA法测定蛋白浓度,然后用于SDS-PAGE和Western blot检测。 3. 组织的裂解和样品的收集: a. 对于海肾萤光素酶转基因动物等组织样品的裂解,优先推荐先把组织样品液氮冷冻研磨成粉末后,按照组织重量和裂解液体积1:10的比例进行裂解(例如20mg组织粉末加入200μl海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液进行裂解);也可以按照组织重量和裂解液体积1:10的比例进行匀浆(例如20mg组织加入200μl海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液用玻璃匀浆器或者电动匀浆器进行匀浆)。 b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于海肾萤光素酶报告基因检测。 注1:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。 注2:制备的样品也可以用BCA法测定蛋白浓度,然后用于SDS-PAGE和Western blot检测。