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吉凯小建议: a. 注射病毒前,为确定核团定位是否正确,建议您使用神经顺行示踪的DiI染料于注射后1周,神经逆行示踪的荧光金(Flouro gold)染料于注射后2周切片,并对照图谱确认注射的核团位点无误,再进行病毒注射,可有效提高病毒标记的成功率。 b. 注意小鼠的状态:由于俯卧体位以及脑立体定位仪的夹持,容易造成小鼠窒息死亡,因此需要随时确认小鼠气道通畅。另外,对于手术切开的部位,应适当滴加生理盐水,防止伤口干燥。 c. 大鼠颅骨水平位定位操作:定位时将大鼠固定成颅骨水平位后,先定位到前囟,以前囟为原点,向前或向后、向左或向右、向下(先在颅骨上打孔)到达核团位置,需要强调的是,坐标是以前囟为原点,而不是以钻孔后的脑表面为原点。 d. 冰冻切片时注意,先从所要核团外开始切(还不到核团所在层面),拿到的切片对照图谱中的一些参照物来判断核团是否准确(对照物可选大而清晰的海马、视交叉,脑室、核团附近的特殊结构如纤维索等等),切片同时注意调节冻台角度,使切片角度与图谱一致。
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