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PCR
聚合酶链反应(PCR),是以cDNA为模板,利用变性,退火和延伸多步骤、多循环来扩增目的DNA片段。在该反应过程中,目的DNA产量呈指数增长,使一些极为微量DNA样品检测成为可能。具有反应特异性强,灵敏度高,简单快捷,对样品纯度要求低等特点。
实验步骤:
1. 样品获取、处理和制备
1.1 悬浮细胞:将悬浮细胞1×106 个/mL培养液倒入离心管中,离心沉淀细胞。PBS冲洗2次,将细胞离心底部,向离心管中加入500-1000μl Trizol,然后置于-80度冰箱保存。或者将离心底部的干细胞置于-80度冰箱保存。
1.2 贴壁细胞:用胰酶消化细胞1×106个/mL,离心PBS冲洗2次,将细胞离心底部,向离心管中加入500-1000μl Trizol,然后置于-80度冰箱保存。或者将离心底部的干细胞置于-80度冰箱保存。
1.3 组织:采集新鲜组织100mg,放入离心管中,做好标记,于液氮冷冻片刻后,置于-80度冰箱保存。
1.4 血液:用抗凝管收集的全血1mL,加入RNA保护剂,做好标记,置于-80度冰箱保存。
2. DNA质控
3. PCR扩增
4. 琼脂糖凝胶电泳
我们提供:
1. 抽取的DNA和电泳图
2. 操作步骤及详细的试剂和耗材
3. 引物序列
4. 琼脂糖电泳图
5. 原始数据及处理后的正式实验数据
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