手机验证
单克隆
产品包括 | 容量(计数) | 保存温度 | |||
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Glycine Solution (10X) | 1 x 100 ml | 4°C | |||
ChIP Sonication Cell Lysis Buffer (2X) | 1 x 21 ml | 4°C | |||
ChIP Sonication Nuclear Lysis Buffer | 1 x 21 ml | 4°C | |||
ChIP Buffer (10X) | 1 x 20 ml | 4°C | |||
ChIP Elution Buffer (2X) | 1 x 2.5 ml | 4°C | |||
5 M NaCl | 1 x 3 ml | 4°C | |||
ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads 9006 | 1 x 780 µl | 4°C | |||
Protease Inhibitor Cocktail (200X) | 1 x 850 µl | -20°C | |||
RNAse A (10 mg/ml) | 1 x 50 µl | -20°C | |||
Proteinase K (20mg/ml) | 1 x 100 µl | -20°C | |||
SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers 7014 | 1 x 150 µl | -20°C | |||
SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers 7015 | 1 x 150 µl | -20°C | |||
Histone H3 (D2B12) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulated) 4620 | 1 x 100 µl | -20°C | |||
Normal Rabbit IgG 2729 | 1 x 50 µl | -20°C | |||
DNA Binding Buffer | 1 x 30 ml | RT | |||
DNA Wash Buffer (add 4x volume ethanol before use) | 1 x 6 ml | RT | |||
DNA Elution Buffer | 2 x 1 ml | RT | |||
DNA Purification Columns and Collection Tubes | 1 x 30 包 | RT |
SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit 包含对细胞或组织样品进行多达 24 次染色质免疫沉淀所需的缓冲液和试剂,优化后,每次免疫沉淀可使用 4 X 106 个细胞或 25 mg 组织。一项完整检测可在短达两天内完成,并且可在使用更多或更少细胞或组织样品时随意扩增或缩减。该试剂盒可用于 ChIP-qPCR 和 ChIP-seq。
细胞或组织用甲醛固定后进行裂解,染色质经超声处理被碎裂可获得 200-1000 bp 的染色质片段。基于超声处理的碎裂方法是一种比较传统的染色质碎裂方法,但超声处理应进行优化,才可使用最低的所需超声处理量来获得所需的片段大小,因为过度超声处理会降低免疫沉淀效率,尤其是对于转录因子和辅因子而言。该试剂盒中的细胞与胞核裂解缓冲液经优化可最大化组蛋白、转录因子和辅因子的富集。使用经 ChIP 验证的抗体和 ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads 进行染色质免疫沉淀。在蛋白质-DNA 解交联后,DNA 使用 DNA 纯化离心柱进行纯化,以便简单快速地回收 DNA 并去除蛋白污染物,无需进行苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。免疫沉淀期间,特定 DNA 序列的富集可使用标准 PCR、定量实时 PCR、芯片 ChIP 扩增、测序或克隆技术等各种方法进行分析。
SimpleChIP® Plus Kit 还提供确保 ChIP 实验成功的重要对照。该试剂盒包含对人和小鼠核糖体蛋白 L30 (RPL30) 基因进行 PCR 检测所需的阳性对照 Histone H3 Antibody、阴性对照 Normal Rabbit IgG Antibody 和引物组。组蛋白 H3 是染色质的一种核心组分,能在基因组内结合多数 DNA 序列,包括 RPL30 基因座。由于几乎所有被检测基因座上富含Histone H3,因此,Histone H3 Antibody 可用作通用阳性对照。
染色质免疫沉淀 (ChIP) 测定法是一种用于在细胞天然染色质背景下探测蛋白质-DNA 相互作用的强大的通用技术 (1,2)。这种测定法用于检测与基因组某个特定区域有关的多种蛋白,或相反,用于检测某种特殊蛋白结合的基因组的多个区域 (3-6)。它可用于确定各种蛋白被募集到某个基因启动子上的特定顺序,或用于“测定”整个基因位点上某种特定组蛋白修饰的相对数量 (3,4)。除了组蛋白外,ChIP 测定法还可用于分析转录因子与辅助因子、DNA 复制因子和 DNA 修复蛋白的结合。进行 ChIP 检测时,细胞或组织首先用甲醛固定,甲醛是一种可逆的蛋白-DNA 交联剂,可“维持”细胞中发生的蛋白-DNA 相互作用 (1,2)。细胞进行裂解,染色质采集后使用超声处理或酶消化法进行碎裂。染色质随后使用对某种特殊蛋白或组蛋白修饰具有特异性的抗体进行免疫沉淀。任何与目标蛋白或组蛋白修饰有关的 DNA 序列都会作为交联染色质复合体的一部分进行共沉淀,并且该 DNA 序列的相对数量会在免疫选择过程中达到富集。免疫沉淀后,蛋白质-DNA 交联被逆转,DNA 得以纯化。标准 PCR 或定量实时 PCR 用于测量通过蛋白特异性免疫沉淀达到富集的某种特定 DNA 序列的数量 (1,2)。或者,ChIP 测定法还可与基因组微芯片(芯片上的 ChIP)技术、高通测序或克隆策略联合使用,它们都能对蛋白-DNA 相互作用和组蛋白修饰进行全基因组分析 (5-8)。
Tripathi, R. et al. (2018) Sci Signal 11, .
Yang, X. et al. (2018) Biochem Biophys Res Commun , .
图 6. 小鼠脑细胞交联 30 分钟后用杜恩斯匀浆器分解成单细胞悬液。使用 SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit #56383 对经超声处理的染色质与 RING1B (D22F2) XP® Rabbit mAb #5694 或 SUZ12 (D39F6) XP® Rabbit mAb #3737 进行染色质免疫沉淀。
使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。RING1B 和 SUZ12 分别是 PRC1 和 PRC2 多梳阻遏蛋白复合体的组分,并且已知共同位于染色质上。图显示 RING1B 和 SUZ12 在 HoxA 基因簇内结合,HoxA 基因簇 是 RING1B 和 SUZ12 的已知靶标。
货号 | 产品名称 | 应用 |
56383S | SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit(超声法,磁珠) | ChIP ChIP-seq |
9005S | SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)(酶解法,磁珠) | ChIP ChIP-seq |
9004S | SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads)(酶解法,琼脂糖微珠) | ChIP |
9003S | SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)(酶解法,磁珠) | ChIP ChIP-seq |
9002S | SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads)(酶解法,琼脂糖微珠) | ChIP |
56795S | SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina®(DNA 文库构建) | ChIP-seq |
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