本试剂盒T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成,和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同,T Simple载体通过改造pBlueScript II SK(+),在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入 Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基,因此有更高的重组效率。同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。此外,本公司载体连接体系还有背景低(蓝斑小于10%),重组率高(白斑中超过90%有插入片段),可快速连接等特点。本说明书末列出了T Simple 载体相关的技术资料,其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列,只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。
试剂盒组份:
T Simple Vector(30ng/μl)———————20μl
1000bp Control(30ng/μl)-——————5μl
10×PEG Enhancer-———————————50μl
10×Ligation Buffer-—————————40μl
2×Quick Ligation Buffer-———————100μl
T4 DNA ligase(5Uμl)—————————20μl