注意事项:
预防RNase污染,应注意以下几方面:
1、使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2、玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3、配制溶液应使用无RNase的水。
4、操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
使用方法:
A.miRNA加Poly(A)尾的过程:
1、首先根据所用RNA的量,按如下公式,用1 mM Tris(PH8.0)来稀释10 mM ATP:
ATP稀释系数=5000/__ng的总RNA
例:如果总RNA的起始用量为100ng,那么ATP稀释系数=5000/100=50。即将ATP稀释50倍(1μl的10 mM ATP加49μl的1 mM Tris,PH8.0)。
2、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入以下试剂至总体积25μl。