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急性脊髓损伤(ASCI)大鼠模
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武汉云克隆动物公司
急性脊髓损伤(ASCI)大鼠模型
1. 术后一般情况观察 :各损伤组大鼠的术后基本情况基本一致,打击后大鼠均表现为身体痉挛性颤动,尾巴痉挛性摆动,双下肢及躯体回缩样扑动。麻醉苏醒后大鼠双下肢呈弛缓性瘫痪,可出现尿潴留或尿失禁。解剖可见伤后大鼠硬脊膜内充血或水肿。2.做BBB评分:0分:无可见后肢运动,1分:一或两个关节轻微运动,通常为髋和/或膝关节,都可认为造模成功;3.斜板实验:将大鼠身体垂直于斜板的纵轴放置,斜板由自制的表面粗糙的木板制成,大鼠利用前肢和后肢的力量保持身体停留自斜板上。斜板每次升高或降低5度,以保证大鼠能停留在斜板上5秒,以能停留5秒的最大角度为其功能值。4.BDA示踪术:术后5W,将大鼠麻醉后固定在脑立体定位仪上,纵行切开颅顶区头皮,剪开骨膜并推向四周,消毒棉签擦拭颅骨,参考大鼠脑离体定位图谱,以前囟为原点,共选择 8 个位置钻孔,微量进样器将5% BDA 溶液1μL注射入大鼠脑运动皮质区,进针深度自颅骨表面起始约3.5mm,微量注射泵设置注射时间为5min,(留针5min)注射完毕后缝合头皮。2w后取损伤节段以下脊髓组织标本进行BDA 荧光染色,观察皮质脊髓束神经纤维。5.大鼠坐骨神经荧光金逆行追踪:各组随机取大鼠,麻醉后沿股外侧肌间隙显露坐骨神经,通过组织钳钳夹挫伤坐骨神经,在避光条件下使用微量注射器在坐骨神经挫伤区多点注射2%荧光金,每侧坐骨神经注射0.4ul,注射速度为0.1ul/min。每注射位点留针5min,切口内撒8*104U的青霉素粉剂,逐层缝合切口,造模后正常饲养。1周后予脊髓损伤处取材进行组织学检查。进行冰冻切片,20um切片,每组每只动物5张切片,荧光显微镜下观察荧光金标记细胞的分布情况。
HE 染色可以观察到假手术组灰、白质组织结构基本完整,神经细胞在灰质中分布均匀、胞体饱满、形态正常、细胞膜完整,白质内神经纤维排列整齐, 细胞间质均匀。SCI 组可见灰、白质组织结构不完整,损伤区灰质可见大片出血、大片坏死灶 、细胞肿胀、有的出现囊腔,白质内神经纤维排列不规则。
应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显
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