凝胶迁移探针生物素标记试剂盒

特别提示：包括凝胶迁移探针生物素标记试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：凝胶迁移探针生物素标记试剂盒
英文名称：EMSA Probe Biotin Labeling Kit
产品货号：YT189
产品规格：20次

本试剂盒是通过TdT把生物素标记的dUTP添加到单链DNA 3"末端，然后通过退火产生生物素标记的EMSA探针的试剂盒。通常DNA的3"末端被标记后不会干扰基于序列特异性蛋白结合的EMSA检测。Terminal Deoxynucleotidyl Transferase(TdT)可以在不依赖于模板的情况下催化在DNA的3"-OH端加上dNTP的反应。关于TdT催化双链DNA末端加dNTP的反应效率，3"端突出的双链DNA要比平端或3"端缩进的双链DNA高很多。TdT催化单链DNA末端加dNTP的反应效率要比双链DNA高很多。在适当的条件下，TdT也可以催化RNA 3"末端加NTP的反应。

本试剂盒适合标记纯化的单链DNA，如果用于标记EMSA探针，可以在单链标记后再进行退火。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control Oligo，可以用作检测DNA标记效率的对照。如果每个标记反应的探针量为5pmol，本试剂盒可以用于20个标记反应。

试剂盒组份：
TdT Buffer(5X)———————————250μl
TdT(10U/μl)————————————20μl
Biotin-11-dUTP(5μM)————————100μl
Biotin-Control Oligo(0.4μM)————100μl
Ultrapure water———————————1ml
探针标记终止液———————————200μl
TE—————————————————15ml
退火缓冲液(10X)——————————150μl


储存条件：-20℃。

除了凝胶迁移探针生物素标记试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：凝胶迁移试剂盒(EMSA试剂盒)
货号：YT185
规格：100次
本试剂盒是用于EMSA(也称gel shift)研究的一个试剂盒。通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。本试剂盒提供了进行EMSA实验的探针标记、蛋白和DNA结合以及EMSA上样等的主要试剂，使EMSA实验变得简单方便。

试剂盒组份：
T4 Polynucleotide Kinase————————————100U
T4 Polynucleotide Kinase Buffer(10X)——————100μl
Nuclease-Free Water——————————————1ml
探针标记终止液—————————————————100μl
5M 醋酸铵———————————————————600μl
EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)——————————200μl
EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色，10X)——————200μl
EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X)——————200μl
TE———————————————————————1ml/管，共2管

EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。

每个EMSA/Gel-Shift试剂盒足够标记10-20次探针，足够进行100个蛋白和探针的结合反应。

注意事项：
1. 需自备待标记的EMSA探针，需自备用于探针标记的同位素，需自备EMSA胶配制的相关试剂。
2. 细胞核蛋白的抽提可以使用百奥莱博的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(YT041)。
3. 如需做super-shift，需自备用于super-shift的抗体。
4. 本实验涉及到同位素的操作，请严格按照同位素的相关管理条例进行操作。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：ARE凝胶迁移探针(10μM)
货号：YT204
规格：30μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的ARE consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的ARE位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约90个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行60个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争，可以进行90-180个冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

ARE consensus oligo的序列如下：
5"-ACT GAG GGT GAC TCA GCA AAA TC-3"
3"-TGA CTC CCA CTG AGT CGT TTT AG-5"

ARE即Antioxidant Response Element(抗氧化响应元件)，该顺式作用元件含有AP1结合位点，可以和AP1结合，但Nrf2是其更专一性结合的转录因子。例如NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase)和HO-1(Heme Oxygenase-1)都受Nrf2通过ARE元件进行转录调控。

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：生物素标记CREB凝胶迁移探针(0.2μM)
货号：YT220
规格：200μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的并经生物素(Biotin)标记的CREB consensus oligonucleotide。这个生物素标记的双链寡核苷酸含有公认的CREB结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的生物素标记探针可以进行约200-400个样品的EMSA检测。

CREB consensus oligo的序列如下：
5"-AGA GAT TGC CTG ACG TCA GAG AGC TAG-3"
3"-TCT CTA ACG GAC TGC AGT CTC TCG ATC-5"

本生物素标记EMSA探针已经过纯化，可以直接用于EMSA结合反应。本生物素标记EMSA探针可以和百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)配套使用。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒 (YT190)的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：OCT-1凝胶迁移突变探针(1.75μM)
货号：YT236
规格：60μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的OCT-1 consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－OCT-1的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。

OCT-1 consensus oligo的序列如下：
5"-TGT CGA ATG CAA ATC ACT AGA A-3"
3"-ACA GCT TAC GTT TAG TGA TCT T-5"

EMSA突变探针－OCT-1中OCT-1的公认的结合位点发生了突变，从而使OCT-1无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和OCT-1的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和OCT-1的结合的条带不会被抑制。参考下图。


一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。