TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（

FITC）

价格 ￥1092
品牌弗元生物 Fuyuanbio
货号 FY600017
产地上海
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数量：
10000
英文名：
TUNEL KIT
CAS号：
无CAS号
保质期：
1年
供应商：
弗元生物
保存条件：
-20℃
规格：
20T

货号	产品名称	规格	目录价（元）	促销价（元）
FY600017-20T	TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（FITC）	20 TEST	1560	1092
FY600017-50T	TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（FITC）	50 TEST	2730	1911

产品简介：

细胞在发生凋亡时，细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA，DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段，而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT 酶）把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端，从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测，这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。

本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸，因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有：石蜡包埋组织切片，冰冻切片，贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。

被引文献
乔文姝. 桦mu酮酸-紫杉醇纳米药物体系构建及其抗乳腺癌活性[D].哈尔滨工业大学,2020.

肖博. 橙皮苷对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响及其机制[D].华北理工大学,2020.

产品编号：
FY600017-20T
FY600017-50T
存储条件：
-20 ℃避光保存，有效期12个月或更久；
若频繁使用可在4℃避光保存3个月；
避免反复冻融。
产品组分

编号	名称	20T	50T
A	rTdT酶	20 μl	50 μl
B	标记混合物	1000 μl	2500 μl

产品简介：
细胞在发生凋亡时，细胞内激活的DNA内切酶会切断核小体间的基因组DNA，DNA会被降解成为约180 bp-200 bp 的片段，而正常或增殖细胞很少发生DNA断裂。脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT 酶）把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3’-OH 末端，从而使DNA片段标记上绿色荧光。然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测，这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法细胞凋亡检测。
本产品能够在DNA碎片末端标记上千bp的核苷酸，因而具有极高的灵敏性。可检测的样本类型有：石蜡包埋组织切片，冰冻切片，贴壁细胞和悬浮细胞。检测方法可以使用荧光显微镜或者流式细胞仪。
自备耗材和设备：
1 ml 移液器
200 μl 移液器
20 μl 移液器
15 ml离心管
流式细胞仪
荧光显微镜
PBS
PI或DAPI染色液（选做）
蛋白酶K（选做）
适用实验与操作过程：

样本处理
1. 悬浮细胞（细胞悬液）

收集细胞，PBS洗涤一次。
含1%甲醛的PBS或者4%DUOJU甲醛室温固定30分钟。摇床轻轻晃动防止细胞成团。
PBS再洗涤1次。
含0.2% Triton X-100的PBS重悬细胞，室温孵育5分钟。
1. 贴壁细胞（细胞爬片/涂片）

PBS洗涤细胞1次。
含1%甲醛的PBS4%DUOJU甲醛室温固定30分钟。
PBS洗涤1次。
用含0.2% Triton X-100的PBS室温孵育5分钟。
1. 冰冻切片

4%DUOJU甲醛室温固定60分钟。
PBS洗涤2次，每次5分钟。
含0.5% Triton X-100的PBS，室温孵育5分钟。或者用20 μg/ml的蛋白酶K室温作用15-30分钟（若用蛋白酶K通透处理，后续需用PBS洗涤2-3次，每次5分钟，将蛋白酶K漂洗干净）。
1. 石蜡切片

脱蜡：二甲苯脱蜡2-3次，每次5-10分钟。
复水：用无水乙醇，90%乙醇，70%乙醇，蒸馏水依次浸泡，每次2-5分钟。
滴加20 μg/ml 蛋白酶K室温处理15-30分钟。
PBS洗涤2-3次，每次5分钟，将蛋白酶K漂洗干净。

配制TUNEL反应体系

	1个样本	N个样本
标记混合物	50 μl	50×N μl
rTdT酶	1 μl	1×N μl
总体积	51 μl	51×N μl

流式细胞仪检测悬浮细胞或者细胞悬液

PBS洗涤细胞1-2次，每次5分钟。细胞沉淀中加入TUNEL反应液50 μl。37℃避光反应60分钟。
PBS洗涤2-3次，每次5分钟。
选作：加PI或者DAPI染色液1 μl /ml，染细胞核。
补加500 μl PBS，流式细胞仪检测。

荧光显微镜检测细胞涂片或者细胞爬片或者组织切片

PBS洗涤1-2次，每次5分钟。
加入TUNEL反应液50 μl。37℃避光反应60分钟。
PBS洗涤3次，每次5分钟。
选作：加PI或者DAPI染色液1 μl /ml，染细胞核。
荧光显微镜下观测并拍照。注意

注意事项与常见问题：

单个反应的细胞数量是多少？

流式细胞仪检测推荐细胞总数为3-5 × 10⁶。对于细胞爬片或者涂片，推荐60-90%汇合度。对于常规组织的冰冻切片或者石蜡切片，推荐切片厚度为2-5 μm，避免切片太厚。

是否需要避光？

荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

细胞离心条件？

对于悬浮细胞或者细胞悬液，洗涤时候离心条件推荐为300 g、5分钟。

细胞固定条件？

细胞样品固定可以用1%甲醛的PBS溶液或者4%的中性DUOJU甲醛。组织切片样品推荐用4%的DUOJU甲醛。

细胞通透处理条件选择？

细胞样品通透推荐用0.2%的Triton X-100或者70%的预冷乙醇-20℃通透1-4小时。细胞样品可以在70%的乙醇溶液中-20℃保存1周。冰冻切片样品通透可以选择0.5%的 Triton X-100或者20 μg/ml的蛋白酶K。石蜡切片样本推荐用20 μg/ml的蛋白酶K进行通透处理。蛋白酶K做通透处理的时候，需要摸索通透时间，时间太短造成通透不彻底，时间太长容易脱片。

使用时需及时清洗流式细胞仪。

PI流式上机时具有一定的粘性，请及时清洗流式细胞仪，避免堵塞。连续上机数量过多也可能导致仪器堵塞导致数据误差，可在检测到一定数量的样本时进行次氯酸清洗，然后进行剩余样本的检测。

弗元生物，致力于打造具有国际影响力的生物医学品牌。

弗元生物立足于生物科技蓬勃发展的上海，与张江药谷、中科院、三甲医院等生物医学领域的各企事业单位协作紧密，共同为中国生物医学研究贡献力量。公司以干细胞与再生医学研究为核心，业务经营范围辐射到细胞生物学、分子生物学、免疫学等生物医学领域的多个相关学科。

至2019年初，公司有技术服务事业部、再生医学事业部和生命科学事业部三个主要发展部门。目前，在国际期刊杂志发表论文7篇，中文核心期刊发表论文1篇，申请国家发明专利4项，拥有商标9项；生命科学事业部，已经上市科研产品十余项，在研产品数十项；再生医学事业部，具有在研项目多项，包括间充质干细胞治疗缺氧性脑病、再生医学软骨、再生医学骨等，生物人工肝；技术服务事业部，服务了多家企业和科研机构，在再生医学的基础和转化研究上进一步完善了服务体系。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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