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    CRISPR/Cas9基因敲除服务

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    CRISPR/Cas9基因敲除服务

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    • 商家诚信度 
    • 入驻年限  2年
    • 南京市栖霞区江苏生命科技创新园F7楼6层

    站内推广

      • 服务名称:

        CRISPR/Cas9基因敲除

      • 提供商:

        南京科瑞斯生物

      • 规格:

      免费技术答疑,CRISPR/Cas9基因敲除等相关问题,统统免费答疑~

          服务简介          

      根据给定GeneID或DNA序列,设计3个敲除位点,合成正负Oligo DNA,构建敲除载体,通过测序验证载体是否构建成功。在构建成功的基础上,中量摇菌,提取去内毒素的浓度达到1μg/μl 的质粒,并转染细胞,进行敲除效率验证。敲除效率验证一般在Hela细胞上进行,也可以在指定细胞上进行验证。在PCR扩增基因编辑区域的DNA后,通过测序验证敲除效率,一般测序峰图在敲除位点附近出现套峰时,说明该位点的敲除效率较高。
       

          技术信息          

      1. 基因敲除(Gene Knockout)

      Cas9系统使目标区域的基因组断裂,利用基因组自身的非同源末端连接的修复机制,在完成修复的过程中,原断裂处会出现不可预知的插入、缺失、突变,从而将生物体(或细胞)中的基因改变成无功能性基因(无效等位基因:null allele)的一种遗传学技术。

      2. 基因敲除技术特点

      2.1 通过将基因敲除的个体或细胞与正常的个体或细胞相比较,研究者可以揭示特定基因的功能。
      2.2 在基因组水平上将目标基因修改或变成无效等位基因,遗传背景干净清晰,是研究基因功能的金标准。

      3. CRISPR/Cas9技术与RNAi技术的比较

      3.1 CRISPR/Cas9技术优势
      (1)在基因组水平上编辑目标基因,高度模拟目标模型。
      (2)遗传背景干净清晰,多次重复实验结果更稳定。
      (3)技术热点高增加文章的影响力。
      3.2 RNAi技术的缺点
      (1)仅部分抑制该基因的功能。
      (2)在转录后(包括翻译)水平上下调基因表达,非基因组水平上的彻底改变!
      (3)会出现每次实验间的误差。
      (4)非特异性强;脱靶效率高(Smith et al., 2017. Evaluation of RNAi and CRISPR technologies by large-scale gene expression profiling in the Connectivity Map. PLoS Biol 15(11): e2003213. )


           科瑞斯优势          

      1.特有的检测手段可大大缩短服务周期
      2.可同时进行支原体检测以及目标细胞株的STR鉴定

      3.若实验未按预期完成,技术费用全免!
      4.相邻的10bp内多位点的突变与单一点突变价格相同


            科瑞斯服务     

       客户只需提供GeneID——基因分析以及细胞状态评估———构建载体——细胞转染——单克隆筛选——目标基因敲除的细胞株的获得

            科瑞斯发表文章       
      序号 文章题目 杂志名称 影响因子
       1 Polyploid cells rewire DNA damage response networks to overcome replication stress-induced barriers for tumour progression Nature communications 12.353
       2 Sequential Posttranslational Modifications Program FEN1 Degradation during Cell-Cycle Progression Molecular Cell 14.248
       3 Mutation of DNA Polymerase β R137Q Results in Retarded Embryo Development Due to Impaired DNA Base Excision Repair in Mice Scientific Reports  4.122
       4 Targeting DNA Flap Endonuclease 1 to Impede Breast Cancer Progression Ebiomedicine 6.183
       5 The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation   Oncogene 7.519
       6 FEN1 promotes tumor progression and confers cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer  Molecular Oncology 5.314
       7 EGFR-TKI-induced HSP70 degradation and BER suppression facilitate the occurrence of the EGFR T790 M resistant mutation in lung cancer cells Cancer Letters 6.491
       8 JMJD1B Demethylates H4R3me2s and H3K9me2 to Facilitate Gene Expression for Development of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells  Cell Reports 8.032
       9 Synergistic antitumor effect of combined paclitaxel with FEN1 inhibitor in cervical cancer cells  DNA Repair  4.461  
       10  Wnt pathway is involved in 5-FU drug resistance of colorectal cancer cells   Experimental & Molecular Medicine  5.584  

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