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稳定转染细胞株的构建服务

稳定转染细胞株的构建服务
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供应商信息

深圳市百恩维生物科技有限公司
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成立时间:2010
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简介: 技术服务
提供商: 百恩维生物
地区: 中国深圳
服务名称: 稳定转染细胞株的构建服务
 
                                       稳定表达细胞株构建

    稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。

    在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞,是功能研究的前提条件之一。而稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染(或转染)一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。

用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上,得到单细胞长出的阳性单克隆,继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。

百恩维有着多年构建稳转细胞株的经验,已在H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。

实例:
       HMSC-ad稳转细胞株               SiHa稳转细胞株                     HL7702稳转株  

    
    产品特点:
    1、稳定:保证15代以内稳定转染细胞稳定表达。
    2、迅速:一般控制在1个月以内完成构建。
    3、经济:价格实惠,性价比高。
    4、质量保证:对外源基因进行严格鉴定。

 筛选稳定细胞株的两种方法
    1、转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系
    对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。
另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。

    2、病毒感染筛选稳定细胞株
   病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不发生基因重排,是制备稳定细胞株的理想载体。 

    稳定转染细胞株服务流程
    1、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上,如需病毒转染,则包装病毒。
    2、筛选浓度测定:以 10-14 天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
    3、细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到 60%-80% 覆盖。
    4、细胞转染:用构建好的载体(或包装好的病毒)转染目的细胞。
    5、抗生素筛选。
    6、鉴定筛选结果。
 
    客户需要提供
    1、构建好的外源基因载体或基因模板。
    2、待转染的细胞系( 1×106 个细胞,可传代,倍增时间小于 48 小时),特殊细胞需提供培养基。
   
我们提供
    1、构建好的外源基因载体(百恩维构建载体)。
    2、构建好的稳定细胞系。
    3、构建稳转细胞株实验报告及相关的外源基因表达分析。

    相关技术服务及产品:
    病毒包装
    蛋白表达与纯化
    转染试剂
 

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   稳定表达细胞株构建   稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。  在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞,是功能研究的前提条件之一。而稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染(或转染)一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上,得到单细胞长出的阳性单克隆,继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。上海基尔顿生物有着多年构建稳转细胞株的经验,已在H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。    产品特点:    1、稳定:保证15代以内稳定转染细胞稳定表达。    2、迅速:一般控制在1个月以内完成构建。    3、经济:价格实惠,性价比高。    4、质量保证:对外源基因进行严格鉴定。    稳定表达细胞株构建的两种方法    1、转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系。对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。    2、病毒感染筛选稳定细胞株   病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不
细胞的稳转株构建 实验原理      稳转细胞株是指经合适的药物浓度进行药物筛选后,得到外源DNA稳定整合到宿主染色体,并可以长时间表达外源目的基因的细胞。稳定表达细胞株弥补了瞬时感染(或转染)实验中外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的抗性筛选有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、灭稻瘟素(Blasticidin)等。若实验需求构建稳转细胞株,我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法,此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组,且整合位点处于转录相对活跃的区域,从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。应用 长期观察外源基因的表达,进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究 需要进行大规模蛋白合成 实验原理   稳转细胞株是指经合适的药物浓度进行药物筛选后,得到外源DNA稳定整合到宿主染色体,并可以长时间表达外源目的基因的细胞。稳定表达细胞株弥补了瞬时感染(或转染)实验中外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的抗性筛选有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、灭稻瘟素(Blasticidin)等。若实验需求构建稳转细胞株,我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法,此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组,且整合位点处于转录相对活跃的区域,从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。实验流程实验结果展示点击查看慢病毒包装实验详情点击查看腺病毒包装实验详情 点击查看AAV病毒包装实验详情求购询价在任何时段以邮件的形式通知我们,我们会在工作日及时联系询价客户。或在工作日直接联系我司客服求购询价,商议细节。客服电话:021-64197338  021-5838580   Email:service@research-bio.com   过表达慢病毒包装 稳转株 稳转套餐     <1.5K
一、服务介绍  本公司构建稳转细胞株的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选,最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的稳转细胞株。我们有着多年构建稳转细胞株的经验,已在H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。 二、 服务内容  1. 载体构建:将外源基因构建到合适的载体上,如需病毒转染,则包装病毒;2. 筛选浓度测定:以 10-14 天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度;3. 细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到 60%-80% 覆盖;4. 细胞转染:用构建好的载体(或包装好的病毒)转染目的细胞;5. 抗生素筛选;6. 鉴定筛选结果。 HMSC-ad稳转细胞株    三、 服务说明  1. 客户提供:待处理细胞株(如需公司提供请说明);  2.构建质粒(可选,需另付费),合成siRNA等(可选,需另付费);3.  实验周期:1-2个月;4. 若另有疑问欢迎向本公司咨询,我们将竭诚为您服务。四、质量承诺   1. 稳定转染的细胞系;2.权威的实验报告;3. 详细的实验步骤;4. 真实的原始实验数据。 
概念和原理      稳定表达细胞株(稳转细胞株)是指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达的细胞株。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。    用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上,得到单细胞长出的阳性单克隆,继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素( puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素( neomycin)。    筛选稳定细胞株方法有两种:    转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系;病毒感染筛选稳定细胞株。科研和临床应用在基因劝能的研究中,稳定表达细胞株弥补了在一些功自B实验中瞬时感染(或转染)由于外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白质间相互作用。标本采集、保存、运输    细胞:若是在液氮中冻存细胞,冻存管立即置于干冰中运输;若是新鲜培养细胞,待细胞铺满培养瓶底部(培养48h),将细胞培养瓶加满培养基,24h(18-37°C)运输到实验室。实验所需试剂和药品请按照说明书保存条件运输。质粒:在滤纸(最好灭菌)上用铅笔画一直径0.2cm-0.4cm圈,将一定体积的质粒点在圈内(≥1ug),自然风干后置于自封袋中邮寄;或-20℃邮寄提取好的质粒DNA;或常温邮寄含质粒DNA的菌液。客户须知客户需提供:    构建好的外源基因载体或基因模板;待转染的细胞系(1x106个细胞,可传代,倍增时间小于48h),特殊细胞需提供培养基。报告形式本公司提供:    构建外源基因稳定表达细胞株实验报告及相关的外源基因表达分析;    构建好的外源基因载体;    构建好的稳定细胞系。                                                     做实验,扫一扫博舜联合医学实验中心   www.komouse.com您的实验,博舜实现!  免费热线:400-775-1808

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