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腺病毒包装技术服务

腺病毒包装技术服务
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供应商信息

深圳市百恩维生物科技有限公司
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成立时间:2010
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产品详情

地区: 中国深圳
简介: 技术服务
提供商: 百恩维生物
服务名称: 腺病毒包装技术服务
腺病毒包装技术服务
        百恩维生物(Biowit)的腺病毒为血清5型腺病毒,缺失了腺病毒的早期表达基因序列E1和E3区。E1是腺病毒复制所必须的,E1的缺失使其不能自身复制,只能依靠包装细胞如HEK293细胞提供的反式互补进行复制扩增,以此保证腺病毒的安全性。E3基因表达的蛋白能对抗宿主的抗病毒防御系统,E3区的去除能减少宿主的体内免疫反应。
         Biowit的腺病毒(Adenovirus,AdV)包装通常采用的是最新的AdMAX系统,通过Cre-loxp重组酶,使共转染到HEK293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和骨架质粒(腺病毒基因组质粒)在重组酶的作用下产生重组腺病毒,获得的病毒滴度更高。
        同时Biowit生物也拥有AdEasyTM腺病毒包装系统,可供客户选择。
Biowit腺病毒包装技术特点:  
(1) 采用5型E1/E3缺陷型腺病毒,生物安全性更高;
(2) 最新的AdMAX系统,病毒生产更快捷;同时也有AdEasyTM系统可供选择。
(3) 有多种过表达和shRNA腺病毒穿梭载体;
(4) 可带有荧光标记基因(GFP、RFP、YFP等),有多种启动子可更换;
(5) 包装空间大,最高可插入8K目的基因。
(6) 采用柱纯化工艺,纯度更高,滴度高达1010~1011 pfu/mL。

                                        图1 AdMAX系统重组过程示意图

Biowit腺病毒包装技术路线:


服务流程:


       您只需给我们提供详细的基因信息,选定的所需的腺病毒载体,我们就能为您生产出符合您要求的带有目的基因的腺病毒。
       另外百恩维生物经过鉴定与质量控制:载体测序鉴定、荧光法测定滴度、感染活性测定等,保证给您提供的病毒正确可靠。
Biowit腺病毒感染细胞实例:


腺病毒概述
        腺病毒(Adenovirus,AdV)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,基因组长约35000 bp,理论上可编码22~40个基因,两端各有长约100~150bp的末端反向重复序列(ITR),在其左端ITR3,端为长约300bp的包装信号(Ψ)。病毒颗粒直径约80~110 nm,病毒衣壳有252个壳粒,呈规则的正二十面体面体结构,其中包括240个六联体和12个位于正二十面体顶部的五联体构成。
        腺病毒是一种非整合型双链DNA病毒,在自然界中广泛分布。尽管一些类型的腺病毒会引起人胃肠道、呼吸系统或眼部的急性感染,但是应用于基因治疗研究的腺病毒是安全的,对人无致病、致畸、致癌的潜在危害。
        利用基因工程手段将腺病毒基因组DNA改造成多种基因操作表达载体,目前常用的腺病毒包装系统有:AdMax系统和AdEasyTM系统。
AdEasyTM包装系统 
         AdEasyTM 包装系统主要的特点是利用Cre/loxP系统在大肠杆菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因组的过程,获得环状的重组腺病毒基因组,并且具有在细菌中复制的必需元件。将重组腺病毒基因组酶切线性化后转染HEK293细胞,避免了双质粒共转染得到重组腺病毒。
        使用这个系统需要注意以下问题: 
(1) 要用能表达Cre重组酶的特定的大肠杆菌,建议建立菌种库以免细菌发生变化;
(2) 由于重组是在细菌中发生的,微小的基因组变化不易发现; 
(3) 要获得高品质的重组腺病毒毒种(高病毒产量、高目的基因表达)应挑选多个重组腺病毒质粒,分别转染HEK293细胞,获得多个重组病毒来筛选。
AdMax包装系统 
        AdMax包装系统是通过Cre/loxP 获得重组病毒,这个过程发生在HEK293细胞中,从而避免在细菌中重组。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的包装质粒共转染HEK293细胞,利用Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒。这个系统有多种优势,包括操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高、目的基因的表达水平高等。
         与AdEasy系统相比,AdMax系统有一定的优势:只需要3~4周就能完成从质粒构建到重组出毒,成功率大于98%(其中95%的克隆含有目的基因),因在真核细胞内重组出毒,保持了对腺病毒的生存压力,有助于重组腺病毒的基因组的完整性;而AdEasy系统的出毒成功率只有18~34%(Stratagene公司新版的AdEasy XL系统成功率在94%左右),且在细菌(BJ5183)中完成病毒基因组重组,理论上,失去了生存压力的腺病毒基因组更容易发生突变,病毒遗传背景及活性可能会受到影响。
        腺病毒载体有下列优点:
1、腺病毒的基因结构与功能研究的比较清楚;
2、可装入基因的容量较大(8K);
3、转染范围广,转染率较高,所有腺病毒载体均有转染分裂期和非分裂期细胞的能力;
4、不整合到靶细胞基因组,无插入突变,无致癌性,对人无致病、致畸、致癌的潜在危害;
5、可以复制出滴度高(可以达到1011 pfu/mL)、稳定性好、基因转移效率高的病毒;
6、适用于在难以转染的细胞中进行的RNA干扰、过表达特定基因或过表达特定microRNA研究和In Vivo实验。

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腺病毒包装技术服务        百恩维生物(Biowit)的腺病毒为血清5型腺病毒,缺失了腺病毒的早期表达基因序列E1和E3区。E1是腺病毒复制所必须的,E1的缺失使其不能自身复制,只能依靠包装细胞如HEK293细胞提供的反式互补进行复制扩增,以此保证腺病毒的安全性。E3基因表达的蛋白能对抗宿主的抗病毒防御系统,E3区的去除能减少宿主的体内免疫反应。         Biowit的腺病毒(Adenovirus,AdV)包装通常采用的是最新的AdMAX系统,通过Cre-loxp重组酶,使共转染到HEK293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和骨架质粒(腺病毒基因组质粒)在重组酶的作用下产生重组腺病毒,获得的病毒滴度更高。        同时Biowit生物也拥有AdEasyTM腺病毒包装系统,可供客户选择。Biowit腺病毒包装技术特点:  (1) 采用5型E1/E3缺陷型腺病毒,生物安全性更高;(2) 最新的AdMAX系统,病毒生产更快捷;同时也有AdEasyTM系统可供选择。(3) 有多种过表达和shRNA腺病毒穿梭载体;(4) 可带有荧光标记基因(GFP、RFP、YFP等),有多种启动子可更换;(5) 包装空间大,最高可插入8K目的基因。(6) 采用柱纯化工艺,纯度更高,滴度高达1010~1011 pfu/mL。                                        图1 AdMAX系统重组过程示意图Biowit腺病毒包装技术路线:服务流程:       您只需给我们提供详细的基因信息,选定的所需的腺病毒载体,我们就能为您生产出符合您要求的带有目的基因的腺病毒。       另外百恩维生物经过鉴定与质量控制:载体测序鉴定、荧光法测定滴度、感染活性测定等,保证给您提供的病毒正确可靠。Biowit腺病毒感染细胞实例:腺病毒概述        腺病毒(Adenovirus,AdV)是一种无包膜的线性双链DNA病毒,基因组长约35000 bp,理论上可编码22~40个基因,两端各有长约100~150bp的末端反向重复序列(ITR),在其左端ITR3,端为长约300bp的包装信号(Ψ)。病毒颗粒直径约80~110 nm,病毒衣壳有252个壳粒,呈规则的正二十面体面体结构,其中包括240个六联体和12个
蛋白质组学技术服务优惠大酬宾活动,只要你来,我们就送.一、腺病毒服务简介腺病毒(adenovirus)是一种无包膜的线状双链DNA病毒。它的宿主范围很广,既可感染分裂细胞,又可感染非分裂细胞。逆转录病毒在感染宿主细胞时,病毒基因组及其携带的外源基因独立于宿主基因组外游离表达,因此无插入突变性,安全性更高。腺病毒载体的外源基因装载量较大、表达速度快,产生的病毒滴度高,因此已经被广泛应用于基础研究和基因治疗中。辉骏生物使用的腺病毒包装系统包括一个穿梭质粒和一个辅助质粒,携带外源基因的穿梭质粒与含有腺病毒基因组(E1/E3缺失)的辅助质粒共转染包装细胞后,利用Cre-loxP重组酶切割系统,即可产生携带外源基因的非复制型重组腺病毒,重组效率大大提高。包装出的腺病毒液可直接感染宿主细胞,介导外源基因的瞬时、高效表达。辉骏生物的腺病毒载体包含多种荧光标签(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子,可充分满足客户不同实验设计的要求。 二、腺病毒表达系统的特点1> 病毒基因不整合到染色体中,而是游离于宿主细胞染色体外瞬时表达,无插入致突变性;2> 有广泛的宿主范围,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用;3> 不需要转染试剂,操作简便,转染效率极高;4> 外源基因装载容量大,可插入高达8kb的外源基因片段;5> 能同时表达多个基因,可以将含有两个基因的双表达盒插入腺病毒转移载体中,或者用不同的重组病毒共转染目的细胞株来分别表达一个蛋白;6> 病毒感染后,外源蛋白表达快,实验周期短。 三、腺病毒技术整体流程A. 腺病毒载体的构建:根据客户的不同需要,将目的基因片段连接至腺病毒穿梭载体;B. 腺病毒包装:腺病毒穿梭质粒与辅助质粒一起转染293细胞进行包装;收集富含腺病毒颗粒的细胞上清液,浓缩后进行滴度测试,得到滴度≥1×108 TU/mL的腺病毒液;                                                                 图1 腺病毒技术服务整体流程四、腺病毒穿梭载体元件       在腺病毒的包装系统中,腺病毒基因组质粒负责携带腺病毒的大部分骨架元件,穿梭质粒负责携带外源基因表达盒。两者共转染包装细胞后发生同源重组,携带外源基因的病毒基因
腺病毒服务简介        腺病毒(adenovirus)是一种无包膜的线状双链DNA病毒。它的宿主范围很广,既可感染分裂细胞,又可感染非分裂细胞。逆转录病毒在感染宿主细胞时,病毒基因组及其携带的外源基因独立于宿主基因组外游离表达,因此无插入突变性,安全性更高。腺病毒载体的外源基因装载量较大、表达速度快,产生的病毒滴度高,因此已经被广泛应用于基础研究和基因治疗中。        辉骏生物使用的腺病毒包装系统包括一个穿梭质粒和一个辅助质粒,携带外源基因的穿梭质粒与含有腺病毒基因组(E1/E3缺失)的辅助质粒共转染包装细胞后,利用Cre-loxP重组酶切割系统,即可产生携带外源基因的非复制型重组腺病毒,重组效率大大提高。包装出的腺病毒液可直接感染宿主细胞,介导外源基因的瞬时、高效表达。       辉骏生物的腺病毒载体包含多种荧光标签(如GFP或RFP等)、多种抗性筛选标签和多种启动子,可充分满足客户不同实验设计的要求。腺病毒技术服务项目                                                                       表1 腺病毒服务项目及内容 分类 服务编号 项目名称 客户提供 服务描述 基因过表达腺病毒服务 FG201 基因过表达腺病毒载体构建 目标基因的模板 构建载体 FG202 基因过表达腺病毒包装套餐 目标基因的模板 (1)构建载体 (2)腺病毒包装 microRNA腺病毒服务 FG211 microRNA过表达载体构建 microRNA前体或初始产物模板 构建载体 FG212 microRNA过表达腺病毒包装套餐 microRNA前体或初始产物模板 (1)构建载体 (2)腺病毒包装 RNAi腺病毒服务 FG221 RNAi腺病毒载体构建 目标基因登录号或序列 (1)设计并合成1条干扰序列 (2)构建载体 FG222 RNAi腺病毒包装套餐A 目标基因登录号或序列 (1)设计并合成3条干扰序列(保
腺病毒包装腺病毒是一种线性双链DNA病毒,由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点,重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中,并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。宿主范围广,腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外,还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。因腺病毒的感染不依赖细胞周期,故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。腺病毒具有嗜上皮细胞特性,因目前大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞,这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。病毒滴度高,可用于动物水平的实验。有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中;实验中虽然会有一定机率出现RCA(即复制型腺病毒),但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体,所以本系统的安全性相对较高。 ◇服务内容:1)腺病毒穿梭载体的构建:根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等;2)腺病毒包装过程:将腺病毒穿梭质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,通过Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒颗粒。◇服务流程:1)将外源基因构建至穿梭载体上;2)将穿梭载体与腺病毒骨架载体进行LR体外重组;3)将重组成功的腺病毒载体线性化,转染至HEK 293细胞中,包装腺病毒;3)将获得的腺病毒感染HEK 293细胞,继续扩增,以获得更多的腺病毒;5)收获腺病毒,提取其基因组DNA,进行PCR鉴定,以确定所得腺病毒的正确性。◇您只需提供:靶基因信息。◇我们提供:提供重组后的腺病毒载体质粒,以及试验结果报告单。◇实验周期:6-7周。 

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