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染色质免疫共沉淀(Ch-IP)

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染色质免疫共沉淀(Ch-IP)
  • ¥9000
  • 北京
  • 在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片段的DNA序列。
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  • 商家诚信度 
  • 入驻年限  2年
  • 中关村生命科学园生命园路8号

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  • 服务名称: 染色质免疫共沉淀(Ch-IP)
    提供商: 北京吉田生物科技有限公司
    规格:

    一、技术原理

    在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片段的DNA序列。

     

    实验步骤

    1.       样品准备与交联

    细胞收集后,用37%的formaldehyde处理细胞,交联核酸与DNA结合蛋白;加入甘氨酸终止。

    2.       细胞超声波破碎染色质

    用超声方法随机把染色质破碎成200-1000 bp的DNA片段;片段分成两部分,一份用于免疫共沉淀,一份用于对照实验(Input DNA)。

    3.       免疫沉淀反应

    使用目的蛋白质的特异性抗体与超声破碎的DNA片段进行免疫沉淀,形成DNA-蛋白质-抗体复合物,利用protein A/G琼脂糖磁珠富集抗体复合物。通过抗原和抗体反应形成DNA-蛋白质-抗体复合体,然后沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段

    4.       DNA-蛋白质-抗体复合物的解交联和DNA纯化

    将富集的DNA-蛋白质-抗体复合体解交联释放DNA片段,并进行纯化;Input DNA的片断作不进行IP实验,但需要去交联并纯化

    5.       PCR鉴定

    比较ChIP DNA, Input DNA及对照DNA信号强度,进行普通PCR或者相对精确的荧光定量PCR扩增。

     

    三、服务流程

    1.       甲醛处理细胞

    2.       超声破碎染色质

    3.       加入proteinA,沉淀抗体-靶蛋白-DNA复合物

    4.       解交联

    5.       PCR分析

     

    四、服务说明

    1.       客户提供

    新鲜的样品材料(组织或细胞);ChIP级别的抗体(或由我公司代购);如ChIP结束后进行检测,input作为对照;如结束后进行普通PCR或者荧光定量PCR,则需要提供预测靶基因结合位点的具体序列或目标靶基因的名称、种属、序列或GeneBank Acession)

    2.       公司提供

    1)检测图;

    2)完整的实验报告,包括对每个步骤的详细说明(具体操作方法、试剂或溶液浓度等),以及相应的结果及分析。

    3.       实验周期

    3-4周。

    4. 价格

    9000元/次 (含试剂盒) 抗体由客户提供

     

    五、质量承诺

    提供清晰的图片、可靠的数据和分析结果。

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