Western Blotting的最后一步也是最重要的一步即酶与底物的反应。其原理是,蛋白质或核酸电泳分离后转印到膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制ECL工作液,在室温下孵育膜1分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒中,然后暗室中将X光胶片压在膜上曝光数秒到数分钟。显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。也可直接对印迹膜进行荧光CCD扫描。光信号支持重复曝光,以获得最佳结果,也可脱抗体后再次检测。