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    研选HighGene转染试剂

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    HighGene转染试剂

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    • 商家诚信度 
    • 入驻年限  3年
    • 武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器1.1期7栋4层01室
      • 货号:

        RM09014

      • 保存条件:

        4度保鲜

      • 保质期:

        2年

      • 数量:

        1000

      • 规格:

        1mL

      产品概要


      HighGene转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。适用于核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)的转染,对大部分真核细胞具有很高的转染效率。

       

      产品优势

       

      大量试验测试表明,与常规转染试剂产品相比,HighGene转染试剂具有以下优势:

      • 转染效率较高
      • 批次稳定,实验重复性好
      • 对于贴壁细胞和悬浮细胞均适用
      • 无明显细胞毒性
      • 适用于siRNA细胞转染
      • 适用于质粒共转染
      • 转染试剂性质稳定


       

      产品特性


      已验证细胞系:HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F、Sf9、U87MG、HepG2、MCF-7、NIH3T3、Neuro-2a
      储存条件:2-8℃储存,保质期两年

       

      产品检测图片


      1、HighGene转染试剂具有较高的转染效率

      在6孔细胞板中分别接种293T、HCT116、C6三种细胞,细胞密度为60%左右,分别使用HighGene转染试剂和两种市面同类产品进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量均为2μg,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
       



      2、HighGene转染试剂实验重复性高度一致

      在6孔细胞板中接种293T和HeLa细胞,分别铺置三个复孔,细胞密度为80%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。





      3、HighGene转染试剂实验重复性高度一致

      在6孔细胞板中分别接种293T和HeLa细胞,细胞密度为70%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,两种不同批次的HighGene转染试剂用量均为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。




      4、HighGene转染试剂批次稳定

      在6孔细胞板中接种NIH3T3细胞或Neuro-2a细胞,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。




      5、HighGene转染试剂适用于多种贴壁细胞系

      在125mL摇瓶中接种30mL密度为1 x106 个/mL HEK293F或Sf9悬浮细胞,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为30μg,HighGene转染试剂用量为60μL,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。




      6、HighGene转染试剂适用于HEK293F等悬浮细胞的转染

      在6孔细胞板中接种293T细胞,细胞密度为70%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg, HighGene转染试剂用量为4 μL,细胞转染16、36、48h后,在荧光显微镜下观察并拍照。




      7、HighGene转染试剂无明显细胞毒性

      在96孔板中接种HEK293T、HeLa、HCT116细胞,每孔接种5000个细胞,细胞密度为50%左右,5个复孔,使用2μL/mL剂量HighGene转染试剂分别处理细胞24h和48h,然后使用CCK8试剂检测细胞的活性。




      8、HighGene转染试剂无明显细胞毒性

      在96孔板中接种HEK293T、HeLa、HCT116细胞,每孔接种10000个细胞,细胞密度为70%左右,5个复孔,分别使用0、4μL/mL、 8μL/mL、16μL/mL剂量的HighGene转染试剂处理细胞24h,然后在光学显微镜下观察并拍照。




      9、HighGene转染试剂无明显细胞毒性

      在6孔细胞板中接种293T和HeLa细胞,细胞密度为80%左右,细胞转染时,Cy3 siRNA用量为100pmol,HighGene转染试剂用量为5μL,或YAP1 siRNA用量为200pmol,HighGene转染试剂用量为5μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照(A),或制备细胞样本进行WB实验,YAP1抗体选用ABclonal A1002(B)。




      10、HighGene转染试剂适用于siRNA细胞转染

      在6孔细胞板中接种293T细胞,细胞密度为80%,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,Cherry真核表达质粒用量为2μg ,HighGene转染试剂用量为8μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。




      11、HighGene转染试剂适用于质粒共转染

      在6孔板中接种HeLa细胞,细胞密度为80%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg, HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。反复冻融和37℃处理不影响HighGene转染试剂的细胞转染活性。
      备注:HighGene转染试剂分别冻融1~5次处理和37℃放置1~5天处理。




      12、HighGene转染试剂性质稳定

      在6孔细胞板中接种HepG2细胞,分别在贴壁状态和悬浮状态进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。难转染细胞消化悬浮后可在一定程度上提高转染效率。



      产品检测图片

      操作流程:


      贴壁细胞转染(以HEK293T细胞为例):

       
      • 1、将293T细胞接种到6孔板中,细胞密度控制在70%-90%为宜;
        注:根据实验需求,可以选择不同的细胞培养装置,细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1
      • 2、取2μg质粒加入到盛有100μL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为A液;取4μL HighGene转染试剂加入到另一个盛有100μL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为B液;
        注: MEM、1640、F12等基础培养基均可用于HighGene转染试剂的溶剂,不同的细胞培养装置所需质粒的量和HighGene转染试剂剂量详见附表2
      • 3、将100μL含有HighGene转染试剂B液缓慢滴加到100μL含有质粒A液中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置15-20分钟;
      • 4、将200μL HighGene转染试剂/质粒复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中,轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布;
        注:轻轻晃动细胞培养板即可,切勿剧烈摇动细胞培养板,以免细胞脱落漂浮!
      • 5、细胞转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基;
        注:半量换液时,吸弃一半原有完全培养基,补加一半新鲜完全培养基
      • 6、细胞转染24-48小时后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等,或加入相应筛选药物(G418或Puromycin)可获得稳定细胞株。

      悬浮细胞转染(以HEK293F细胞为例)
       
      • 1、第一天,在125mL摇瓶中接种30mL密度为1×106个/mL HEK293F悬浮细胞;
      • 2、第二天,取30μg质粒加入到盛有1.5mL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为A液;取60μL HighGene转染试剂加入到另一个盛有1.5mL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为B液;
      • 3、将1.5mL含有HighGene转染试剂B液缓慢滴加到1.5mL含有质粒A溶中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置15-20分钟;
      • 4、将3mL HighGene转染试剂/质粒复合物均匀滴加到盛有30mL HEK293F悬浮细胞的125mL摇瓶中,轻轻摇动摇瓶使其混合均匀;
      • 5、细胞转染5天后,根据蛋白表达的情况(胞内表达或分泌表达),收集细胞或细胞培养上清,进行后续蛋白纯化操作。

      siRNA细胞转染(以HeLa细胞为例)
      • 1、第一天,将HeLa细胞接种到6孔板中,细胞密度控制在70-90%为宜;
      • 2、第二天,取100pmol siRNA加入到盛有100μL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为A液;取5μL HighGene转染试剂加入到另一个盛有100μL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为B液; 
        注:不同的细胞培养装置所需siRNA的量和HighGene转染试剂剂量详见附表3
      • 3、将100μL含有HighGene转染试剂B液缓慢滴加到100μL含有质粒A液中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置15-20分钟;
      • 4、将200μL HighGene转染试剂/质粒复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中,轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布; 
        注:轻轻晃动细胞培养板即可,切勿剧烈摇动细胞培养板,以免细胞脱落漂浮!
      • 5、细胞转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基; 
        注:半量换液时,吸弃一半原有完全培养基,补加一半新鲜完全培养基
      • 6、细胞转染24-48小时后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等。

      注意事项
       
      • 1、转染前细胞应处于良好的生长状态,以对数生长期为佳,推荐细胞传代后12-24小时内、细胞密度为70-90%时进行转染;
      • 2、使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率,推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒,A260/A280比值为1.8~2.0,质粒浓度在300ng/μL以上;
      • 3、在配制转染试剂与质粒复合物时,需使用无血清、无抗生素的基础培养基作为溶剂,细胞培养孔中的完全培养基不影响细胞转染效率;
      • 4、在细胞转染实验中,根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例,一般质粒的量(μg)与HighGene转染试剂剂量(μL)使用比例在1:1~1:4之间,推荐比例为1:2;
      • 5、对于毒性比较敏感的细胞,建议转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基;
      • 6、转染试剂如遇沉淀,轻轻摇动管身,至沉淀溶解即可使用;
      • 7、本产品仅限用于科学研究,不得用于临床诊断和治疗。



       
      温馨提示:不可用于临床治疗。

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