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腺相关病毒AAV包装/载体构建一站式服务
AAV相比于其他病毒载体的优势:
a. 表达时间长: 绝大多数重组rAAV 不会整合到基因组上,而是在宿主细胞中串联形成附加体(episome)存在于细胞核中 ,细胞在细胞复制和分裂后会丢失附加体,并因此失去基因表达能力,rAAV在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达6个月以上;
b. 扩散性强: rAAV 的体积小,滴度高,因此具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性,可以穿透血脑屏障,是理想的神经元和胶质细胞感染工具;
c. 特异性强: rAAV 有十数种常用的血清型,不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力,是动物实验首;
d. 安全性高: 目前还没有发现AAV 对人体致病,是美国FDA 批准的可以直接用于人体基因治疗的最安全的病毒载体;
e. 免疫原性低: 当AAV 用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时,不易造成免疫反应;
f. 高稳定性: rAAV 病毒在4℃可以保存1 周,并且对氯仿等试剂具有抗性。
AAV包装流程
根据衣壳蛋白的差异,目前AAV可分为12种血清型(AAV-1~AAV-12)和100多种变异体。不同的AAV 具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性,因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别,这也导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同,那么如何选择合适的血清型呢,首先我们需要了解下AAV 不同血清型的组织趋向性。
吉凯小建议:
1. 如您不确定选择哪种血清型,可尝试使用感染谱最广的9型。
2. 如初次使用AAV,可使用AAV彩虹装进行预实验,通过彩虹装比较不同血清型对目标组织的感染效果,摸索最佳的注射方法、注射位点、病毒用量等,以便得到更理想的实验结果。
AAV彩虹装
AAV彩虹装是吉凯基因通过查询相关文献,将适合不同组织的常用血清型组合而成的套装产品。
*各血清型在神经系统研究中作用:1型,可作为顺行示踪跨单突触标记的血清型使用 ;9型,可作为顺行示踪非跨突触标记的血清型使用;Retro,可作为逆向示踪非跨突触标记的血清型使用; PH.eB,适合中枢神经系统,可穿过血脑屏障、胎盘屏障,常通过尾静脉注射使用 。
现货AAV产品涵盖2/5/8/9 四种血清型。最快5 个工作日发货。
2. 组织特异性启动子AAV
吉凯提供20余种组织特异性启动子AAV载体(下图),可快速实现动物水平组织特异性调控,更高效更精准地表达外源基因。
调控方式 | 载体编号 | 元件顺序 | 载体容量(bp) | 荧光 | 荧光是否融合表达 |
过表达 | GV388 | CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE-hGH polyA | 1207 | EGFP | 融合 |
GV389 | CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA | 1207 | mCherry | 融合 | |
GV410 | CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP | 1130 | EGFP | 非融合 | |
GV411 | CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA | 2819 | 无 | 无荧光 | |
GV461 | CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA | 2890 | 无 | 无荧光 | |
GV467 | CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA | 2095 | EGFP | 融合 | |
GV489 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA | 1285 | EGFP | 融合 | |
GV466 | hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA | 2186 | EGFP | 融合 | |
GV475 | hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA | 2186 | mCherry | 融合 | |
GV488 | gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA | 1591 | EGFP | 融合 | |
干扰 | GV478 | U6-MCS-CAG-EGFP | EGFP | 非融合 | |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry | mCherry | 非融合 | ||
miRNA-up | GV412 | CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA | EGFP | 非融合 | |
GV413 | CMV bGlobin-mCherry-MCS-WPRE-hGH polyA | mCherry | 非融合 | ||
miRNA-down | GV479 | U6-MCS-CAG-EGFP | EGFP | 非融合 | |
GV480 | U6-MCS-CAG-mCherry | mCherry | 非融合 |
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