货号 | 规格 | 价格(元) |
FY600002-20T | 20 TEST | 176 |
FY600002-50T | 50 TEST | 426 |
FY600002-100T | 100 TEST | 806 |
产品简介:
本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。
在正常细胞周期中,G0和G1期有1套染色体,G2和M期细胞有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为1,那么G2和M期的细胞的荧光强度为2,S期的细胞介于1和2之间。
细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。
细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。
本产品可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。
自备耗材和设备:
1 ml 移液器
100-200 μl 移液器
旋窝混匀仪
流式细胞仪
PBS
75%乙醇
适用实验与操作过程:
1. 细胞准备-
贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。
悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。
组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。
注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。
2. 细胞固定
细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。
3. 染色
PI染色工作液配置:0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI染液(A液)和10 μl RNase A(B液),混匀待用。每个细胞样品加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激发波长为488 nm,检测红色荧光。
注意:每个检测细胞数不超过1×106个。
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