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HEPG2.2.15表达HBV
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T25/瓶
见名称
人,大小鼠
正常
见说明书
常温
永生代细胞
贴壁或悬浮
1X10^6 cells
培养操作及注意事项说明一.产品简介1、细胞名称:HEPG2.2.15;表达HBV病毒的人肝细胞2、生长特性: □ 贴壁 □ 悬浮 □半悬浮半贴壁3、细胞生长条件:
4、背景资料:HepG2.2.15是抗HBV新药开发的一个良好的体外研究工具。该细胞株是用2个头尾相连的HBV-DNA全基因的重组质粒转染受体细胞HepG2而成,可在体外无性繁殖,能够长期稳定的向培养上清中分泌HBsAg, HBeAg和完整的Dane颗粒,而且还能产生大量的复制中间体,是体外筛选抗HBV药物的良好模型。二.使用方法1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。2、细胞传代:1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。3、细胞冻存:1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 4、细胞复苏:1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
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