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T4 DNA ligase
企业认证
200
武汉爱博泰克生物科技有限公司
16000 U
Q1:连接效率低的原因和解决方法?
A1:反应Buffer不合适:选择正确的反应Buffer。
A2:反应体系内无ATP等酶辅因子或Mg2+:使用随酶提供的反应Buffer或向其它兼容的Buffer中加入ATP。含ATP或NAD+的Buffer保存超过1年,其内ATP或NAD+可能会降解,导致连接失败。当补加ATP时,确定补加的是核糖核酸ATP(rATP),而不是脱氧核糖核酸ATP(dATP),因为后者不起作用。
A3:反应时间不足:按说明书推荐孵育时间操作,或者适当延长连接反应时间。
A4:连接反应温度不合适:建议在温控准确的设备中按酶最适反应温度进行反应。
A5:连接酶与酶底物选择不当:根据ABclonal推荐的连接酶选择指南,选择合适的连接酶。
A6:反应体系中盐浓度过高或EDTA含量高:纯化DNA或RNA。
A7:去磷酸化步骤完成后,CIP、BAP或SAP失活不彻底:根据厂家推荐的方法去除去磷酸化酶。
A8:连接末端为单碱基突出末端:提高连接酶使用量,延长反应时间。
A9:连接酶失活:使用经过验证的底物验证酶的活性。
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