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环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒说明书
本公司供应的环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒(Cyclooxygenase 2 Inhibitor Screening Kit，也称 COX-2 Inhibitor Screening Kit)是一种利用荧光检测，简单、快速、灵敏地用于人 COX-2 抑制剂高通量筛选的试剂盒。
环氧化酶(cyclooxygenase, COX)又称前列腺素内氧化酶合成酶
(Prostaglandin-endoperoxide synthase, PTGS)，是一种同时具有环氧化酶和过氧化氢酶活性的双功能酶。例如，COX 的环氧化酶活性可以催化花生四烯(Arachidonic Acid, AA)转化为前列腺素 G2(prostaglandin G2, PGG2)，而 COX 的过氧化氢酶活性又可以将前列腺素 G2 转化为前列腺素 H2(prostaglandin H2,
PGH2)。
有两种常见的 COX，一种是组成性表达的 COX-1，另一种是诱导性表达的 COX-2。哺乳动物的 COX-1 与 COX-2 的分子量相似，分别是 70 和 72KDa，其氨基酸序列有 65%同源，其中酶催化活性区域的氨基酸序列几乎一致。COX-1 在很多组织中组成性表达，在胃粘膜、肾脏等中高表达，催化产生维持正常生理功能的前列腺素，从而参与血管舒缩、血小板聚集、胃粘膜血流、 胃黏液分泌及肾脏功能等的调节。COX-2 在正常生理状态下几乎不表达或表达很少，仅在脑、肾脏和生殖器官等中有一定水平的组成性表达。COX-2 在巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和单核细胞等发生炎症反应时，可以被诱导表达。例如受炎性刺激物、损伤、有丝分裂原或致癌物质等促炎介质诱导后，COX-2 的表达增高，从而参与多种病理生理过程。COX-3 是 COX-1 的不同剪接体，和 COX-1 相比，COX-3 多保留了一个内含子，在狗(dog)中该内含子的长度为 93 个碱基，而在人和小鼠中长度为 94 个碱基，因此在狗中 COX-3 是有酶活性的，而人和小鼠中的COX-3 由于移码突变而没有酶活性。
COX-2 与炎症和肿瘤等的发生发展密切相关。因此，COX-2 的选择性抑制剂成为药物研究的一个热点。1991 年 1 月第一个真正意义上的 COX-2 选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib) 经美国 FDA 批准上市，同年 5 月第二个选择性抑制剂罗非昔布(Rofecoxib)也在欧洲上市。这些COX-2 抑制剂药物成功上市，为后续 COX-2 选择性抑制剂的研究和发展开辟了广阔道路。如今在临床上 COX-2 选择性抑制剂已经被广泛用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、牙痛、手术后疼痛以及肿瘤等疾病。
本试剂盒的检测的基本原理参考图 1。在辅助因子(Cofactor)存在的情况下，COX-2 使用其环氧化酶(COX)活性把花生四烯酸(Arachidonic Acid)等底物环氧化生成PGG2 等中间产物， 继而COX-2 使用其过氧化物酶(peroxidase)活性把PGG2 等中间产物催化生成PGH2 等最终产物， 同时把几乎没有荧光的 COX-2 探针(Probe)催化生成有强荧光的探针(Ex560/Em590)。这样通过荧光检测就可以非常灵敏地检测COX-2 的酶活性。如果在反应中加入COX-2 抑制剂(Inhibitor)， 荧光的生成就会被抑制，荧光强度与抑制剂的抑制效果成反比，这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。本反应生成的强荧光探针的最大激发波长为 571nm，最大发射波长为 585nm，推荐检测时的激发波长为 560nm ，发射波长为 590nm。
图 1. 本试剂盒筛选 COX-2 抑制剂的原理图。Probe*表示催化生成的强荧光探针。
本试剂盒中提供了人重组 COX-2(recombinant human COX-2, rhCOX-2)、底物
(Substrate)、辅助因子(Cofactor)、阳性对照 COX-2 抑制剂(Celecoxib)及可以被 COX-2 催化产生荧光的荧光探针(Probe)，并且对 COX-2 和底物的使用量进行了优化。不仅能检测出 IC50 很低的抑制剂，也能检测出 IC50 较高的抑制剂。
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环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒说明书 本公司供应的环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒(Cyclooxygenase 2 Inhibitor Screening Kit，也称 COX-2 Inhibitor Screening Kit)是一种利用荧光检测，简单、快速、灵敏地用于人 COX-2 抑制剂高通量筛选的试剂盒。 环氧化酶(cyclooxygenase, COX)又称前列腺素内氧化酶合成酶 (Prostaglandin-endoperoxide synthase, PTGS)，是一种同时具有环氧化酶和过氧化氢酶活性的双功能酶。例如，COX 的环氧化酶活性可以催化花生四烯(Arachidonic Acid, AA)转化为前列腺素 G2(prostaglandin G2, PGG2)，而 COX 的过氧化氢酶活性又可以将前列腺素 G2 转化为前列腺素 H2(prostaglandin H2, PGH2)。 有两种常见的 COX，一种是组成性表达的 COX-1，另一种是诱导性表达的 COX-2。哺乳动物的 COX-1 与 COX-2 的分子量相似，分别是 70 和 72KDa，其氨基酸序列有 65%同源，其中酶催化活性区域的氨基酸序列几乎一致。COX-1 在很多组织中组成性表达，在胃粘膜、肾脏等中高表达，催化产生维持正常生理功能的前列腺素，从而参与血管舒缩、血小板聚集、胃粘膜血流、 胃黏液分泌及肾脏功能等的调节。COX-2 在正常生理状态下几乎不表达或表达很少，仅在脑、肾脏和生殖器官等中有一定水平的组成性表达。COX-2 在巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和单核细胞等发生炎症反应时，可以被诱导表达。例如受炎性刺激物、损伤、有丝分裂原或致癌物质等促炎介质诱导后，COX-2 的表达增高，从而参与多种病理生理过程。COX-3 是 COX-1 的不同剪接体，和 COX-1 相比，COX-3 多保留了一个内含子，在狗(dog)中该内含子的长度为 93 个碱基，而在人和小鼠中长度为 94 个碱基，因此在狗中 COX-3 是有酶活性的，而人和小鼠中的COX-3 由于移码突变而没有酶活性。 COX-2 与炎症和肿瘤等的发生发展密切相关。因此，COX-2 的选择性抑制剂成为药物研究的一个热点。1991 年 1 月第一个真正意义上的 COX-2 选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib) 经美国 FDA 批准上市，同年 5 月第二个选择性抑制剂罗非昔布(Rofecoxib)也在欧洲上市。这些COX-2 抑制剂药物成功上市，为后续 COX-2 选择性抑制剂的研究和发展开辟了广阔道路。如今在临床上 COX-2 选择性抑制剂已经被广泛用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、牙痛、手术后疼痛以及肿瘤等疾病。 本试剂盒的检测的基本原理参考图 1。在辅助因子(Cofactor)存在的情况下，COX-2 使用其环氧化酶(COX)活性把花生四烯酸(Arachidonic Acid)等底物环氧化生成PGG2 等中间产物， 继而COX-2 使用其过氧化物酶(peroxidase)活性把PGG2 等中间产物催化生成PGH2 等最终产物， 同时把几乎没有荧光的 COX-2 探针(Probe)催化生成有强荧光的探针(Ex560/Em590)。这样通过荧光检测就可以非常灵敏地检测COX-2 的酶活性。如果在反应中加入COX-2 抑制剂(Inhibitor)， 荧光的生成就会被抑制，荧光强度与抑制剂的抑制效果成反比，这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。本反应生成的强荧光探针的最大激发波长为 571nm，最大发射波长为 585nm，推荐检测时的激发波长为 560nm ，发射波长为 590nm。 图 1. 本试剂盒筛选 COX-2 抑制剂的原理图。Probe*表示催化生成的强荧光探针。 本试剂盒中提供了人重组 COX-2(recombinant human COX-2, rhCOX-2)、底物 (Substrate)、辅助因子(Cofactor)、阳性对照 COX-2 抑制剂(Celecoxib)及可以被 COX-2 催化产生荧光的荧光探针(Probe)，并且对 COX-2 和底物的使用量进行了优化。不仅能检测出 IC50 很低的抑制剂，也能检测出 IC50 较高的抑制剂。 -20℃保存，半年有效。S0168-2 COX-2 Probe 和 S0168-3 COX-2 Cofactor (50X)需避光保存。 注意事项： COX-2 Probe 在空气中不太稳定，开启后应尽快使用，且在使用过程中要注意适当避光。COX-2 Probe 的反应产物在还原剂的存在下会很不稳定，样品中带入到最终反应体系中 的二硫苏糖醇(DTT)或者β-巯基乙醇的浓度须低于 10μM。 请确保样品的 pH 值在 7-8 之间，或者确保加入样品后反应体系的 pH 值在 7-8 之间，否则会影响 COX-2 Probe 的稳定性和荧光值。 COX-2 Probe 和 COX-2 Assay Buffer 需要完全解冻并回复至室温后再使用，否则会影响检测结果。rhCOX-2 使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。 COX-2 Substrate 容易被氧化，请尽量避免长时间与空气接触。且在使用和储存过程中请注意保持低温，否则其稳定性可能会受到影响。 待测抑制剂的溶剂可能会对检测产生干扰，如无水乙醇和 70%乙醇。推荐以 COX-2 Assay Buffer、Milli-Q 级纯水、DMSO 为溶剂配制、稀释待测抑制剂，并在对照孔中添加与抑制剂等体积的溶剂以排除干扰。 COX-2 Cofactor、COX-2 Substrate、rhCOX-2 等试剂的量均比较少，在使用前请先适当离心，然后适当混匀后再使用。 Substrate Buffer 有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品；Celecoxib 对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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-20℃保存，半年有效。S0168-2 COX-2 Probe 和 S0168-3 COX-2 Cofactor (50X)需避光保存。
注意事项：
COX-2 Probe 在空气中不太稳定，开启后应尽快使用，且在使用过程中要注意适当避光。COX-2 Probe 的反应产物在还原剂的存在下会很不稳定，样品中带入到最终反应体系中
的二硫苏糖醇(DTT)或者β-巯基乙醇的浓度须低于 10μM。
请确保样品的 pH 值在 7-8 之间，或者确保加入样品后反应体系的 pH 值在 7-8 之间，否则会影响 COX-2 Probe 的稳定性和荧光值。
COX-2 Probe 和 COX-2 Assay Buffer 需要完全解冻并回复至室温后再使用，否则会影响检测结果。rhCOX-2 使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。
COX-2 Substrate 容易被氧化，请尽量避免长时间与空气接触。且在使用和储存过程中请注意保持低温，否则其稳定性可能会受到影响。
待测抑制剂的溶剂可能会对检测产生干扰，如无水乙醇和 70%乙醇。推荐以 COX-2 Assay
Buffer、Milli-Q 级纯水、DMSO 为溶剂配制、稀释待测抑制剂，并在对照孔中添加与抑制剂等体积的溶剂以排除干扰。
COX-2 Cofactor、COX-2 Substrate、rhCOX-2 等试剂的量均比较少，在使用前请先适当离心，然后适当混匀后再使用。
Substrate Buffer 有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品；Celecoxib 对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒说明书
本公司供应的环氧化酶-2(COX-2)抑制剂筛选试剂盒(Cyclooxygenase 2 Inhibitor Screening Kit，也称 COX-2 Inhibitor Screening Kit)是一种利用荧光检测，简单、快速、灵敏地用于人 COX-2 抑制剂高通量筛选的试剂盒。
环氧化酶(cyclooxygenase, COX)又称前列腺素内氧化酶合成酶
(Prostaglandin-endoperoxide synthase, PTGS)，是一种同时具有环氧化酶和过氧化氢酶活性的双功能酶。例如，COX 的环氧化酶活性可以催化花生四烯(Arachidonic Acid, AA)转化为前列腺素 G2(prostaglandin G2, PGG2)，而 COX 的过氧化氢酶活性又可以将前列腺素 G2 转化为前列腺素 H2(prostaglandin H2,
PGH2)。
有两种常见的 COX，一种是组成性表达的 COX-1，另一种是诱导性表达的 COX-2。哺乳动物的 COX-1 与 COX-2 的分子量相似，分别是 70 和 72KDa，其氨基酸序列有 65%同源，其中酶催化活性区域的氨基酸序列几乎一致。COX-1 在很多组织中组成性表达，在胃粘膜、肾脏等中高表达，催化产生维持正常生理功能的前列腺素，从而参与血管舒缩、血小板聚集、胃粘膜血流、 胃黏液分泌及肾脏功能等的调节。COX-2 在正常生理状态下几乎不表达或表达很少，仅在脑、肾脏和生殖器官等中有一定水平的组成性表达。COX-2 在巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和单核细胞等发生炎症反应时，可以被诱导表达。例如受炎性刺激物、损伤、有丝分裂原或致癌物质等促炎介质诱导后，COX-2 的表达增高，从而参与多种病理生理过程。COX-3 是 COX-1 的不同剪接体，和 COX-1 相比，COX-3 多保留了一个内含子，在狗(dog)中该内含子的长度为 93 个碱基，而在人和小鼠中长度为 94 个碱基，因此在狗中 COX-3 是有酶活性的，而人和小鼠中的COX-3 由于移码突变而没有酶活性。
COX-2 与炎症和肿瘤等的发生发展密切相关。因此，COX-2 的选择性抑制剂成为药物研究的一个热点。1991 年 1 月第一个真正意义上的 COX-2 选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib) 经美国 FDA 批准上市，同年 5 月第二个选择性抑制剂罗非昔布(Rofecoxib)也在欧洲上市。这些COX-2 抑制剂药物成功上市，为后续 COX-2 选择性抑制剂的研究和发展开辟了广阔道路。如今在临床上 COX-2 选择性抑制剂已经被广泛用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、牙痛、手术后疼痛以及肿瘤等疾病。
本试剂盒的检测的基本原理参考图 1。在辅助因子(Cofactor)存在的情况下，COX-2 使用其环氧化酶(COX)活性把花生四烯酸(Arachidonic Acid)等底物环氧化生成PGG2 等中间产物， 继而COX-2 使用其过氧化物酶(peroxidase)活性把PGG2 等中间产物催化生成PGH2 等最终产物， 同时把几乎没有荧光的 COX-2 探针(Probe)催化生成有强荧光的探针(Ex560/Em590)。这样通过荧光检测就可以非常灵敏地检测COX-2 的酶活性。如果在反应中加入COX-2 抑制剂(Inhibitor)， 荧光的生成就会被抑制，荧光强度与抑制剂的抑制效果成反比，这样就可以检测出抑制剂的抑制效果。本反应生成的强荧光探针的最大激发波长为 571nm，最大发射波长为 585nm，推荐检测时的激发波长为 560nm ，发射波长为 590nm。
图 1. 本试剂盒筛选 COX-2 抑制剂的原理图。Probe*表示催化生成的强荧光探针。
本试剂盒中提供了人重组 COX-2(recombinant human COX-2, rhCOX-2)、底物
(Substrate)、辅助因子(Cofactor)、阳性对照 COX-2 抑制剂(Celecoxib)及可以被 COX-2 催化产生荧光的荧光探针(Probe)，并且对 COX-2 和底物的使用量进行了优化。不仅能检测出 IC50 很低的抑制剂，也能检测出 IC50 较高的抑制剂。
-20℃保存，半年有效。S0168-2 COX-2 Probe 和 S0168-3 COX-2 Cofactor (50X)需避光保存。
注意事项：
COX-2 Probe 在空气中不太稳定，开启后应尽快使用，且在使用过程中要注意适当避光。COX-2 Probe 的反应产物在还原剂的存在下会很不稳定，样品中带入到最终反应体系中
的二硫苏糖醇(DTT)或者β-巯基乙醇的浓度须低于 10μM。
请确保样品的 pH 值在 7-8 之间，或者确保加入样品后反应体系的 pH 值在 7-8 之间，否则会影响 COX-2 Probe 的稳定性和荧光值。
COX-2 Probe 和 COX-2 Assay Buffer 需要完全解冻并回复至室温后再使用，否则会影响检测结果。rhCOX-2 使用时应在冰上进行。使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。
COX-2 Substrate 容易被氧化，请尽量避免长时间与空气接触。且在使用和储存过程中请注意保持低温，否则其稳定性可能会受到影响。
待测抑制剂的溶剂可能会对检测产生干扰，如无水乙醇和 70%乙醇。推荐以 COX-2 Assay
Buffer、Milli-Q 级纯水、DMSO 为溶剂配制、稀释待测抑制剂，并在对照孔中添加与抑制剂等体积的溶剂以排除干扰。
COX-2 Cofactor、COX-2 Substrate、rhCOX-2 等试剂的量均比较少，在使用前请先适当离心，然后适当混匀后再使用。
Substrate Buffer 有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品；Celecoxib 对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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