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全基因合成
企业认证
全基因合成(基因合成服务)欣百诺在分子生物学实验及重组蛋白制备方面都有着丰富的经验,以重组蛋白制备为核心,为客户提供可靠的分子生物学技术服务,主要包括:基因合成、基因克隆、载体构建、定点突变(单点及多点突变)、DNA操作(片段缺失及拼接等)及质粒大量制备。·基因合成 步骤 1. 表达系统选择及方案设计(此项服务免费) 根据客户所需的要求,推荐最适合的表达系统(大肠杆菌/酵母/昆虫细胞/哺乳动物细胞表达系统)。根据客户选择的表达系统,推荐密码子优化方案。设计最佳的表达载体构建(是否融合表达、是否添加Tag等)及相应的蛋白纯化方案 。提供客户:各种建议方案时间:1~3工作日·基因合成 步骤2. 获取目标基因DNA序列 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。根据选定的表达系统对cDNA进行密码子优化。合成设计好的基因序列或通过基因克隆的方式获得基因序列。提供客户:目标基因(在T载体或常规克隆载体上)及测序报告时间: 2~3周·基因合成 步骤3. 表达载体构建 选定的标签序列/Tag (可选用的Tag见下表)按同一读码框融合于标基因的5’,3’端(亦可融合在基因编码序列中,融合位置需专门设计),也可利用载体上自带的标签序列而无需另外添加。标签序列/Tag列表
Taq名称
用途
HIS
亲和纯化
GST
MBP
Nus
增加蛋白可溶性
trxA
提高蛋白表达量
Myc
表达检测
FLAG
HA
GFP等荧光蛋白
可提供的表达载体(若需特殊的表达载体或启动子序列,需由客户提供):大肠杆菌表达体系载体
Expression Vector
Promoter
载体所含Tag
pET3a, pET11a, pET24a
T7/ac
None or T7 Tag
pET32a
TRX & HIS
pET41a
GST & HIS
pET22b, pET25b, pET26b
Secret
pET28a, pET15b, pRSETb
pET50b, pET43a
Nus, HIS
pPEPTIDE
pMAL-c2x
pGEX4T, pGEX5X, pGEX6P
pQE30
T5
pTrcHisB
Trc
T7, HIS
pTWIN
Intein, CBD
pBV220
PRPL
None
酵母表达体系载体
pPICZα
AOX1
pPIC9K
PGAPZα
GAP
pYES2/CT
GAL1
Bacmid DNA
pcDNA3.1
CMV
pcDNA4.0
EGFP
提供客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告时间:1周·基因合成 步骤4. 质粒大规模柱纯化服务 我们采用国外进口的DNA纯化填料,通过柱纯化方式纯化提取质粒,可为客户提供高纯度质粒,并可根据需求进行去内毒素处理。可对质粒进行大规模柱纯化,提供客户1mg至克级以上的纯化质粒。提供客户:纯化质粒,对于要求去内毒素的质粒提供鲎试剂检测报告时间:1周
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