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上海三抒生物科技有限公司
1μg
pp53-TA-luc (报告基因质粒)是三抒生物自行研发的用于检测p53转录活性水平的报告基因质粒。pp53-TA-luc是以三抒生物的pGL6-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个p53结合位点,可以高灵敏度地检测p53的激活水平。
pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pp53-TA-luc质粒的主要信息如下:
Base pairs | 5659 |
p53 response element | 20-73 |
Minimal TA promoter (pTA) | 96-118 |
luc2 reporter gene | 160-1812 |
SV40 late poly(A) signal | 1847-2068 |
SV40 early enhancer/promoter | 2116-2534 |
Synthetic neomycin phosphotransferase | |
(Neor) coding region | 2559-3353 |
Synthetic poly(A) signal | 3378-3426 |
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region | 3493-3512 |
ColE1-derived plasmid replication origin | 3750 |
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 4541-5401 |
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 5506-5659 |
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region | 5608-5627 |
pp53-TA-luc的多克隆位点及p53 response element的详细图谱如下:
BglI KpnI p53 response element | |||||||||
1 | GGCCTAACTG |
|
CGTTTGCCTT | GCCTGGACTT | GCCTGGCCTT | ||||
CCGGATTGAC |
|
GCAAACGGAA | CGGACCTGAA | CGGACCGGAA | |||||
BglII HindIII | |||||||||
51 | GCCTTGGACA | TGCCCGGGCT |
|
CAGAAGCTTA |
|
||||
CGGAACCTGT | ACGGGCCCGA |
|
GTCTTCGAAT |
|
|||||
Minimal TA promoter | |||||||||
101 | GGTATATAAT |
|
CTTCCAGCTT | GGCAATCCGG | TACTGTTGGT | ||||
CCATATATTA |
|
GAAGGTCGAA | CCGTTAGGCC | ATGACAACCA |
pp53-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pp53-TA-luc)包括:
Aat II | Afl II | Asc I | Ase I | Bsa I | BsaA I | BsiW I | BspM II |
BssH II | Eco72 I | EcoR I | EcoR V | Mlu I | Nde I | Nhe I | Nru I |
PaeR7 I | PflM I | Pme I | Pml I | Psp1406 I | Rsr II | Sac I | SnaB I |
Spl I | Tth111 I | Vsp I | Xcm I | Xho I | Xmn I |
pp53-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pp53-TA-luc once)包括:
Sfi I | GGCCN,NNN`NGGCC | 9 | EcoN I | CCTNN`N,NNAGG | 3034 | |
Bgl I | GCCN,NNN`NGGC | 9 | BsiC I | TT`CG,AA | 3429 | |
Acc65 I | G`GTAC,C | 15 | BstB I | TT`CG,AA | 3429 | |
Asp718 | G`GTAC,C | 15 | Sal I | G`TCGA,C | 3443 | |
Kpn I | G,GTAC`C | 19 | Afl III | A`CRYG,T | 3693 | |
PspA I | C`CCGG,G | 64 | ApaL I | G`TGCA,C | 4007 | |
Xma I | C`CCGG,G | 64 | HgiE II | ACCNNNNNNGGT -1/13 | 4272 | |
Srf I | GCCC|GGGC | 66 | Not I | GC`GGCC,GC | 4513 | |
Sma I | CCC|GGG | 66 | BstX I | CCAN,NNNN`NTGG | 4537 | |
Bgl II | A`GATC,T | 75 | BstE II | G`GTNAC,C | 4540 | |
Hind III | A`AGCT,T | 85 | Ahd I | GACNN,N`NNGTC | 4615 | |
BsrG I | T`GTAC,A | 651 | Bsu36 I | CC`TNA,GG | 4971 | |
Dra III | CAC,NNN`GTG | 1307 | Pvu I | CG,AT`CG | 4985 | |
Gsu I | CTGGAG 21/19 | 1540 | Sac II | CC,GC`GG | 5009 | |
Bpm I | CTGGAG 22/20 | 1541 | Bst1107 I | GTA|TAC | 5125 | |
Apo I | R`AATT,Y | 1923 | Xca I | GTA|TAC | 5125 | |
Mun I | C`AATT,G | 1987 | Spe I | A`CTAG,T | 5444 | |
BamH I | G`GATC,C | 2080 | BsmA I | GTCTC`/9 | 5456 | |
Stu I | AGG|CCT | 2513 | BsmB I | CGTCTC 7/11 | 5457 |
pp53-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3 (5608-5627):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒 |
β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 |
pGL6 (报告基因质粒) |
pGL6-TA (报告基因质粒) |
pGL6-miR (报告基因质粒) |
pAP1-luc (报告基因质粒) |
pAP1-TA-luc (报告基因质粒) |
pARE-luc (报告基因质粒) |
pGRE-luc (报告基因质粒) |
pISRE-TA-luc (报告基因质粒) |
pMyc-TA-luc (报告基因质粒) |
pNFκB-luc (报告基因质粒) |
pNFκB-TA-luc (报告基因质粒) |
pp53-TA-luc (报告基因质粒) |
pRb-TA-luc (报告基因质粒) |
pSTAT3-TA-luc (报告基因质粒) |
pAAT-promoter-luc (报告基因质粒) |
pIL-6-promoter-luc (报告基因质粒) |
pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒) |
pTNF-α-promoter-TA-luc (报告基因质粒) |
pRL-SV40-N (报告基因质粒) |
pRL-SV40-C (报告基因质粒) |
pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒) |
pTNF-α-promoter-TA-luc (报告基因质粒) |
pIL-6-promoter-luc (报告基因质粒) |
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