1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)现货促销

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)现货促销
编号：SY0321
规格：100ml
品牌：百奥莱博
英文名：1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors
产地：国产|进口
本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液（1×），裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

注意事项

1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
2）裂解样品的所有步骤均需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 培养细胞样品：
1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂，使PMSF的最终浓度为1mM。
【注】：请根据实验情况选用酶抑制剂。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂，使PMSF的最终浓度为1mM。
【注】：请根据实验情况选用酶抑制剂。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

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·HRP标记小鼠抗GAPDH单克隆抗体
编号：SY0637
英文名称：HRP-conjugated GAPDH, Mouse mAb
规格：10μl(＞50次)
本品为HRP标记小鼠抗GAPDH单克隆抗体，HRP标记小鼠抗磷酸甘油醛脱*酶单克隆抗体。推荐稀释倍数：WB（1:10000～20000）。

GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)，即磷酸甘油醛脱*酶，可催化甘油醛-3-磷酸向1,3双磷酸甘油酸的转化，是糖酵解的关键酶之一。

GAPDH几乎在所有组织和细胞中都高水平表达，且作为看家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此，在Western blot检测中，被广泛的用作蛋白质标准化内参。

产品类型：小鼠单克隆抗体（Mouse monoclonal, mAb）IgG，内参抗体
反应性：Human,Mouse, Rabbit, Frog, Fish, Chicken, Rat
宿主：Mouse
应用：WB
检测分子量（Molecular Wt.）：～36kDa
储存缓冲液：1 mg/ml in Phosphate buffered saline (PBS) with 15 mM sodiu*(代"m") azide, pH 7.2
纯化方式：亲和纯化; Purity＞95%（SDS-PAGE）
储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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9012-36-6 Agarose L.M.P  低熔点琼脂糖
RN1801 RNAlong RNA长期保存液
BTN130926 DNA样品采集拭子 DNA Sample Swab
BTNpyj19 细胞培养基 Cell Culture Medium
PL0301 高纯度质粒小量快速提取试剂盒(离心柱型)
BL1346 PH值标准液(PH10.01)
F030642 FITC标记小鼠抗鸭IgY(IgG)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Duck IgY*FITC
ARB12835 小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)尿液中含量检测 Mouse macrophage-derived chemokine,mdc ELISA KIT
PY01-023  琼脂粉  250|100克  
BTN130661 RecA蛋白 RecA
1-丁基-3-甲基六*磷酸盐咪唑啉嗡 Camsylate 174501-64-5
2650-17-1 Xylene Cyanol FF   二甲*青
ARB12829 小鼠小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)含量分析 Mouse alpha-fetoprotein lens culinaris agglutⅡn 2,afp-l2 ELISA KIT
棕榈酸  L-Ornithine L-aspartate salt 57-10-3
NF-246 冻干羊抗人C4血清
9041-35-4 Sephadex G-25 medium(葡聚糖凝胶G-25)
ARB13848 猪内皮型一氧化*(代"氮")合成酶(eNOS)ELISA代测服务 Porcine endothelial nitric oxide synthase,enos ELISA KIT
*肽酶抑制剂盐*(代"酸")盐 2,6-Diisopropylphenol 100938-10-1
144-48-9 Iodoacetamide acid 碘代乙酰胺
ZCNXQ01 超级胎牛血清 100ml
ARB11805 人颗粒溶素(GNLY)血清中含量检测 Human granulysin,gnly ELISA KIT
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·细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 647/PI)
编号：SY0473
英文名称：Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit
规格：20 rxn
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor 647标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝*酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝*酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor 647 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

试剂盒组份：
Annexin V-Alexa Fluor 647————————100 μl
PI Staining Solution (20 μg/ml)————200 μl
4×Binding Buffer————————————4 ml

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝*酸与Annexin V-Alexa Fluor 647的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3)如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4)试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
5)Annexin V-Alexa Fluor 647和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

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