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    • 入驻年限  6年
    • 上海市杨浦区密云路1018号复旦科技园808室
    • 货号: HZ-ANXA4-8
      供应商: 沪震生物
      数量: 20
      英文名: Recombinant Annexin A4 (ANXA4)
      保质期: 12个月
      保存条件: 2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月
      规格:
      产品名称:ANXA4重组蛋白
      英文名称:Recombinant Annexin A4 (ANXA4)
      英文简称:ANX-A4; ANX4; PIG28; 35-beta calcimedin; Carbohydrate-binding protein p33/p41; Chromobindin-4; Endonexin I; Lipocortin IV; Placental anticoagulant protein II
      物种:(Human,人);(Mouse,小鼠); (Rat,大鼠)等其它种属。
      来源:原核表达
      宿主:E.coli
      性状:冻干粉
      规格:10µg/50µg/200µg/1mg/1g
      储存:避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月。
      应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
      如果需要有生物活性的蛋白,请参见活性蛋白。
      ANXA4重组蛋白不同的系统步骤稍微有些不同的,大致步骤如下:
      真核表达系统的重组蛋白表达步骤:
      a. 选择表达载体和宿主细胞(常用的CHO和HEK293)
      b. 表达载体的构建
      c. 无内毒素的质粒抽提
      d. 细胞瞬时转染
      e. 表达小试,条件优化
      f. 表达分析和鉴定(SDS-PGAE和WB)
      g. 大量表达
      h. 亲和纯化
      i. 检测和鉴定
      ANXA4重组蛋白原核表达系统的重组蛋白表达步骤:
      a. 选择表达载体
      b. 密码子优化
      c. 基因合成/亚克隆
      d. 转化表达菌株
      e. 蛋白表达小试分析
      f. 如果蛋白可溶,蛋白亲和纯化
      g. 如果蛋白不可溶,则需要变复性来制备可溶蛋白。
      h. 鉴定,包括SDS-PAGE和WB鉴定
      wdaisy,融合蛋白其实应该称为“重组融合蛋白”,它属于重组蛋白的范畴内。
      在重组DNA技术的发展早期,人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后,认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多,ANXA4重组蛋白除了要有强启动子和起始密码子外,良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点,表达水平受密码子喜好程度的影响,也受编码序列中其他目前尚未明了的因素影响。通过改变起始密码子前端的序列,或者在不改变蛋白质序列的条件下利用密码子的简并性改变5’末端编码序列往往有助于解决问题。
      通常,两个基因之间的融合表达能更快地解决这些问题。在这种方式中,目的基因被引入某个高表达蛋白序列(fusion tag)的3’末端,比如大肠杆菌的一段序列,或者任一可在大肠杆菌中高度表达的基因,它提供良好表达所必需的信号,而表达出的融合蛋白的N末端含有由fusion tag编码的片段。fusion tag所编码的可能是整个功能蛋白或是其中的部分。比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白等。
      H+: 原始的菌株,表达量比较低。
      1A1,2D4...3D2,3D8:通过SDS-PAGE鉴定的几个高表达菌株,表达量明显提高。后面的测序结果表明,3D2和3D8的序列一模一样。
      ANXA4重组蛋白展示的就是H+和3D8的5'端DNA序列的比对:QQ图片20040101014240
      红框标记的是两条序列不一样的地方,怎么样?就变了几个碱基的序列,表达量就千差万别。这样的例子太多,值得一试!
       
       
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