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10 mg
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文献和实验点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。 3. 利用 Western Blot 检测 LC3-II/I 比值的变化以评价自噬形成 自噬形成时,胞浆型 LC3(即 LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即 LC3-II),因此,LC3-II/I 比值的大小可估计自噬水平的高低。 LC3 抗体对 LC3-II 有更高的亲和力,会造成假阳性。方法 2 和 3 需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。 4. MDC 染色 MDC 染色
:LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力,会造成假阳性。方法2和3需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。) 4)检测长寿蛋白的批量降解:非特异 5)MDC(Monodansylcadaverine,单丹磺酰尸胺)染色:包括自噬体,所有酸性液泡都被染色,故属于非特异性的。 6)CellTrackerTM Green染色:主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。 在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体
干扰与通过药物抑制相比,特异性更强自噬的研究电镜观察▬自噬研究最直观的检测手段电镜下可以观察到双层膜的自噬体和单层膜的自噬溶酶体结构,其中包裹着未被完全降解的包浆成分。该方法虽然可以直观的观察到自噬体的存在,但难以准确反应自噬活性的强弱。自噬染色▬一般用MDC和AO染色来检测自噬单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin, MDC)是一种荧光色素,其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。MDC 是一种嗜酸性染色剂,通常被用作检测自噬体形成的特异性标记染色剂。吖啶橙(AO)是一种











