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    研选Annexin V 凋亡检测试剂盒

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    Annexin V 凋亡检测试剂盒

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    • 商家诚信度 
    • 入驻年限  7年
    • 上海市浦东新区 新浩路58号18号楼
      • 货号:

        abs50001

      • 英文名:

        Annexin V-PI apoptosis assay kit

      • 数量:

        大量现货

      • 供应商:

        absin

      • 保存条件:

        4℃保存6个月;避免反复冻融。

      • 规格:

        25T/50T

      规格: 25T 产品价格: ¥600.0
      规格: 50T 产品价格: ¥1000.0
      概述
      描述

      在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

      产品组分
        25 Tests 50 Tests 100 Tests
      AnnexinV-FITC 125μl 250μl 500μl
      10×Binding Buffer 1.5ml 2.5ml 5ml
      Propidium Iodide 125μl 250μl 500μl
      性能
      保存方法 4℃保存6个月;避免反复冻融。
      操作步骤 贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
      (1) 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer;
      (2) 细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合),在室温中,2000rpm 离心 5~10 分钟,收集细胞;
      (3) 细胞洗涤:用预冷 1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm 离心 5~10分钟,弃上清洗涤细胞;
      (4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
      (5) Annexin V-FITC 标记:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后,避光,室温孵育 15 分钟;
      (6) PI 标记:上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
      (7) 上机前,补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
      用法说明 (1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁;
      (2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
      (3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
      (4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
      (5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。
      (6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。
      (7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。
      (8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。

      引用文献:
      温馨提示:不可用于临床治疗。

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