T4聚核苷酸激酶

T4聚核苷酸激酶产品及特点：

该酶能够催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5-羟基末端以及3-单磷酸核苷间进行转移和交换。该酶还具有3磷酸酶活性，将3-磷酸基团从寡核苷酸的3磷酸末端、脱氧3-单磷酸核苷和脱氧3-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：

该酶主要用途是：

1. DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。

2. 寡核苷酸5末端的磷酸化，以便进行连接反应。

3. 除去3磷酸基团。

T4聚核苷酸激酶活性单位定义

以Micrococcal Nuclease处理的小牛胸腺DNA为底物，在37℃，pH7.6的条件

下，30分钟内使1 nmol的[γ-32P]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个

活性单位（U）。

纯度

1. 10 U的本酶和1 μg的λDNA-Hind III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

2. 5 U的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

T4聚核苷酸激酶反应条件

反应Buffer，10×：Tris-HCl（pH8.0） 500 mM，MgCl2 100 mM，DTT50 mM。* Buffer在溶解时，如果出现少量沉淀属正常现象保温后使用不影响反应性能。

Buffer成分

Tris-HCl（pH7.5） 50 mM，KCl 50 mM，DTT 1 mM，ATP 0.1 μM，Glycerol 50 %。