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TRIplant Reagen
企业认证
1
1年
4°C避光
大量
百泰克
TRIplant
0.1mg/50 ml/100 ml
【产品名称】产品通用名称:核酸提取试剂产品商用名称: 通用植物总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)【包装规格】RP3301(50次)/RP3302(100次)【预期用途】用于植物样本中总RNA的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物可用于RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆等。【检验原理】针对植物样本开发的特异性裂解液,能高效将RNA和其他植物多糖分开,同时还能有效去除多酚和其他植物次级代谢成份,适合于绝大部分用普通RNA提取试剂盒无法提取的植物,并在近一百多种各类植物(包括十分棘手的松柏类植物)中得到验证。本产品还可以用于富含粘性糖蛋白的动物组织。【主要组成成分】试剂盒由裂解液PL,去蛋白液RE,漂洗液RW,RNase-free H2O,70%乙醇, RNase-free Dnase(可选),10x Reaction Buffer(可选),RNase-free过滤柱,RNase-free吸附柱RA,收集管(2mL)使用说明书和合格证组成。主要组分及储存条件见表 1 。注:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!实验所需试剂但未提供的物品:* 无水乙醇 * β-巯基乙醇(防止褐化现象,非富含多酚类植物可不加) * 无RNA酶的水或0.5% SDS溶液[调配无RNA酶的水,将水加入无RNA酶的玻璃瓶中,加入DEPC至0.1% (v/v)。放置过夜并高压灭菌。SDS溶液必须用DEPC处理过并经高压灭菌的水配制。注:每瓶试剂的净含量应不少于标示值。【储存条件及有效期】1、漂洗液RW在2-8℃条件下保存,长期保存-20℃条件下保存;裂解液PL在室温储存 , 长期保存-20℃条件下保存;RNase-free Dnase,10×Reaction Buffer在-20℃条件下保存,其他试剂可常温保存。2、本试剂盒有效期一年,请在有效期内使用。3、为了避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。【适用仪器】本产品可适用于匹配1.5/2.0 mL 离心管的高速冷冻离心机。建议使用升降速较快的离心机,如百泰克CR3180。【样本要求】新鲜或保存得当的植物样品。样本采集后尽快实验,可在2~8℃暂时保存;若需长期保存,应置于-80℃环境中。【使用方法】事先将裂解液PL 65°C预热,使用前可加入β-巯基乙醇到终浓度0.2%(每1mL裂解液PL加入β-巯基乙醇2μL,防止褐化现象,非富含多酚类植物可不加)。1.样本处理取50~100mg植物组织于液氮中研磨,时间要短,要保持研钵中有液氮(如果没有液氮也可以直接加1mL的裂解液PL后匀浆。组织样品容积不能超过PL容积的10%)。2.转移样品至1.5mL RNase-free离心管中,加入1mL的裂解液PL颠倒混匀,在65°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。3.室温条件下12,000rpm 离心5分钟, 小心取上清转入一个新的RNase-free过滤柱中(若上清表面有漂浮物,用枪头跳开吸取下面液体即可)。4.10,000rpm 离心45秒。收集下滤液(含有总RNA)到一个新的2mL RNase-free离心管中,进行下一步操作。5.在2mL RNase-free离心管中加入等体积70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!),颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)。6.得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内),10,000rpm 离心45秒,弃掉废液,将吸附柱重新套回收集管。(吸附柱RA单次上样量最多700 μL,若样本量大于700 μL需分多次过柱)。含DNA酶操作步骤a.加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心60秒,弃掉废液。b.将吸附柱RA放回空收集管中,12,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制酶消化反应。c.加入已配置好的消化液30μL于吸附膜的中间部位,37℃保温15-30分钟。消化液的配置比例:RNase-Free DNase 2μL,DNase 10×Reaction Buffer 3μL,RNase-Free Water 25μL;RNase-Free DNase的用量可根据DNA量多少来调节,1μLRNase-Free DNase可以消化1μg的RNA,10×Reaction Buffer的量按照比例增减。d.加入500μL 去蛋白液RE,室温放置2分钟,12,000rpm 离心45秒,弃掉废液。e.加入700μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心60秒,弃掉废液。不含DNA酶操作步骤
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253 人阅读发布时间:2019-02-26 14:44
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