Trizol柱总RNA纯化试剂盒/ITrizol Total RNA Purification Kit I

适用于从动物组织、培养细胞、血液、细菌、真菌和植物中纯化总 RNA。仅用于科研，不得用于临床诊断.

【产品介绍】

Trizol 是即用型的试剂，可用于从组织和细胞中纯化总 RNA。这是一种含酚和异硫氰酸胍的单相溶液，便于裂解组织和细胞，抑制 RNA 酶以保持 RNA 完整性。

Trizol 总 RNA 纯化试剂盒 I结合了 Trizol 试剂盒硅胶膜技术，在 20 - 40 分钟内可从动物组织、培养细胞、血液和植物样本中分离 RNA，与传统的 Trizol 沉淀法相比，残留的盐分和蛋白更少。核酸纯化柱可方便结合、洗涤和洗脱，因此可同时操作多个样本。与传统的 RNA 分离技术不同，该柱无需异丙醇沉淀和乙醇洗涤等。样本被 Trizol 试剂裂解。加入氯仿后，匀浆物通过离心分为水相和有机相。RNA 分离至上层水相，而 DNA 分离至中层，蛋白分离至下层有机相。含 RNA 的水相加入乙醇后转移至核酸纯化柱，RNA 结合到硅胶膜上，溶解的蛋白与 PCR 抑制物则被过滤除去。RNA 经 Buffer WA 和 Buffer WBR 洗涤液洗涤后，用 Nase-Free Water 洗脱得到纯化 RNA。洗脱的 RNA 长度在 200 bp 和 10 kb 之间，其中以 tRNA 为主。纯化的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern blot、Dot blot、体外翻译、RNA 酶保护分析等各种分子生物学实验，或保存于-70℃待后续使用。

【温馨提醒】

1. 本产品用于分子生物学实验，仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。

2. 请在本产品标记的有效期内使用。

3. 本产品的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。

【提供的材料和贮存】

注：Trizol试剂应保存于2 - 8℃。其它所有试剂可在室温保存2年，性能无明显变化；如保存于2 - 8℃，则效期更久。在低温的运输或储存条件下，缓冲液中可能会出现沉淀，可在 70℃加热并轻轻摇晃使之溶解。

【未提供的材料设备】

1. 乙醇 (96 - 100 %)

2. 70 %乙醇 (用无 RNA 酶水配制)

3. 氯仿

4. 1.5 ml 离心管 (无菌，无 RNA 酶)

5. 吸头 (无菌，无 RNA 酶)

6. 微量离心机 (配 1.5 ml 和 2 ml 离心管的转子)

7. 振荡器

8. 液氮和研钵 (可能需要)

【快速流程示意图】

【试剂盒应用范围】

样本类型

Trizol总RNA纯化试剂盒I可从人、动物、植物、细菌和真菌来源的组织和细胞样本中分离总RNA。关于样本类型和起始量请参考下表。
 

【实验流程】

[实验前准备]

根据标签所示在 Buffer WA 和 Buffer WBR 中加入乙醇，混匀并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。

使用前将所有缓冲液混匀。

[操作步骤]

从全血中纯化总

RNA无核红细胞的抗凝血、唾液或骨髓样本，请按步骤 1a 操作；

有核红细胞的抗凝血样本，请按步骤 1b 操作。

1a. 在 2 ml 离心管 (未提供) 中加入 1.5 ml 红细胞裂解液，再加入 300 µl 抗凝血，盖紧管盖，上下颠倒轻柔混匀，室温孵育 5 分钟，3,000 rpm 离心 5 分钟。弃去上清，加入 1 ml Trizol 试剂，吹打打散和裂解细胞沉淀。

注意：红细胞裂解液未提供，可从联科生物单独订购，Cat No. MR0504。可根据抗凝血体积，按比例增减红细胞裂解液。

1b. 在 2 ml 离心管 (未提供) 中加入 200 µl 抗凝血，随后加入 1 ml Trizol 试剂，吹打裂解细胞。

2. 加入 200 µl 氯仿，盖紧管盖，用力摇晃 15 秒，12,000 rpm 离心 15 分钟。

3. 吸取 600 µl 上层水相转移至 1.5 ml 离心管中 (未提供)，加入 600 µl 70%乙醇，吹打混匀。

4. 将核酸纯化柱置于提供的 2 ml 离心管中，将步骤 3 中的 600 µl 混合物加入至核酸纯化柱。盖紧管盖，12,000 rpm 离心 30 秒。

5. 弃去滤液，将核酸纯化柱置回到 2 ml 离心管中，将余下的混合物加入核酸纯化柱中。盖紧管盖，12,000 rpm 离心 30 秒。

6. 弃去滤液，将核酸纯化柱放回至 2 ml 离心管，加入 500 μl 含乙醇的 Buffer WA，盖紧管盖，12,000 rpm 离心 30 秒。

注意：使用前，请确认 Buffer WA 中已加入乙醇。

7. 弃去滤液，将核酸纯化柱放回至 2 ml 离心管，加入 600 μl 含乙醇的 Buffer WBR，盖紧管盖，12,000 rpm 离心 30 秒。

注意：使用前，请确认 Buffer WBR 中已加入乙醇。

8. 弃去滤液，将核酸纯化柱置回到 2 ml 离心管中，14,000 rpm 离心 1 分钟。

注意：如果离心机的离心速度达不到 14,000 rpm，则用最高速离心 2 分钟。请勿省略该步骤，否则可能因洗脱物中含有残留的乙醇，对下游实验造成影响。

9. 弃去滤液和离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的不含 RNA 酶的 1.5 ml 离心管中 (未提供)，在纯化柱的膜中央加入 50 µl RNase-Free Water，盖紧管盖，室温静置 1 分钟，12,000 rpm 离心 30 秒。

10. 弃纯化柱，洗脱的 RNA 可立即用于分子生物学实验；或者将 RNA 储存于-70℃备用。

注意：大部分 DNA 已在 Trizol 萃取阶段被去除。如果在一些敏感的下游实验中必须去除残留的微量 DNA，请选择“Trizol 总 RNA 纯化试剂盒 II” (Cat No. MK020002)。