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酵母三杂交技术(Y3H)

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提供商: 广州伯信生物科技有限公司
服务名称: 酵母三杂交技术(Y3H)
地区: 不限
      酵母三杂交系统(three-binding hybrid system)用于分析蛋白和RNA间的相互作用。
      三杂交系统的基本原理是将一个已知的RNA结合蛋白与转录因子的DNA结合domain(如LexA)构建第一个融合蛋白,第二种蛋白(待选的RNA结合蛋白)与转录激活结构域构建融合蛋白。此外构建和表达一杂合RNA,含有二个不同的结合位点。当RNA与二个RNA结合蛋白的结合位点相互作用时可激活报告基因的转录和表达。

 
 
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① 待研究蛋白质名称、Gene ID;
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① 实验报告(实验仪器、试剂、方法、结果、结论)。

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  酵母四杂交系统的原理是在酵母双杂交系统的基础上改进的,用来验证RNA与RNA互作分析;从本质上来说,在质粒构建过程中就是比酵母双杂交系统多了一个基因表达框。  从原理和技术路线上是将两个已知的RNA结合蛋白分别与转录因子的DNA结合domain(如LexA)和激活结构域(activation domain)分别构建融合蛋白。此外构建两个杂合RNA,各自含有二个不同的结合位点,其中一个结合位点是与已知的RNA结合蛋白结合的颈环序列。当RNA与RNA相互作用时可激活报道基因的转录和表达。① RNA结合蛋白选用噬菌体MS2被壳蛋白(MS2 coat protein),MS2 coat protein可识别RNA中的21nt的茎环序列,并与之有较高的亲和力。② 实验中需要用2个质粒表达杂合RNA,一个含有MS2 coat protein结合位点、另一个含有RNA类型的转录激活标签m26。客户提供① 互作RNA物种、名称、序列、基因ID;② 突变位点序列信息。 伯信提供① 检测报告(实验仪器、试剂、方法、结果、结论);② 载体构建过程图,测序结果;③ 互作分析结果。
      酵母三杂交系统(three-binding hybrid system)用于分析蛋白和RNA间的相互作用。      三杂交系统的基本原理是将一个已知的RNA结合蛋白与转录因子的DNA结合domain(如LexA)构建第一个融合蛋白,第二种蛋白(待选的RNA结合蛋白)与转录激活结构域构建融合蛋白。此外构建和表达一杂合RNA,含有二个不同的结合位点。当RNA与二个RNA结合蛋白的结合位点相互作用时可激活报告基因的转录和表达。  客户提供① 待研究蛋白质名称、Gene ID;②   待研究RNA名称、Gene ID;伯信提供① 实验报告(实验仪器、试剂、方法、结果、结论)。
酵母双杂交检测实验技术服务  蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础,研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验,同以往研究蛋白质-蛋白质之间相互作用的实验手段相比,酵母双杂交系统具有其独特优势。1、融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行,蛋白质保持天然的折叠状态,这是其他离体生化检验方法所缺乏的,它所证实的蛋白质间相互作用将更接近于体内的真实水平。2、 双杂交系统的敏感度非常高,蛋白质之间结合常数低至1mmol/L时都可以被侦测。3、 在筛选cDNA 文库时,双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列,它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白,省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。酵母双杂交实验原理以Gal4 系统为例,BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时,DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合,转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下,单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列(GAL UAS)结合但不能引起转录,单独的AD 则不能与GAL UAS 结合;只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时,BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录,从而激活下游报告基因,通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。本公司目前采用TAKARA 公司 SMART 方法构建文库
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