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室温
9个月
Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit
930
北京百奥莱博科技有限公司
50次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销售,产品线涵盖北京石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒品牌在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:北京石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒品牌
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:ALH074
规格:50次
本试剂盒用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取RNA包括microRNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA,然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱,基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
产品组分:
裂解液——————15ml
结合液——————25 ml
漂洗液——————10ml
蛋白酶K——————20mg(可选)
RNase-free H2O——————10ml
基因组DNA清除柱和收集管——————50套
RNA吸附柱和收集管室温——————50套
产品特点:
1.完全不使用有毒的苯酚,氯*(代"仿")等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速,简捷,单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。
3.试剂盒的独特基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保RNA高纯度,可直接用于下游各种实验。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA提取过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
5. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留(DNase 消化也无法做到100%无残留),本试剂盒采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术,绝大多数DNA 已经被清除,可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
6. RNA 纯度及浓度检测:
完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA 与蛋白反应交联会导致RNA 断裂或者降解,一般电泳后UV下只能看到模糊弥散(smear)带型,随着储存的时间越长,降解断裂越严重,甚至只能看到峰值仅仅在100bp 左右的模糊条带。这都属于RNA 提取正常情况。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。
浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free 水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。
储存条件:室温,有效期9个月。
本品别名:石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒|石蜡包埋组织microRNA提取试剂盒|石蜡包埋组织microRNA分离试剂盒|石蜡包埋组织microRNA纯化试剂盒|石蜡包埋组织miRNA分离试剂盒|石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒|石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒|石蜡包埋组织总RNA纯化试剂盒
关于北京石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒品牌的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·组织细胞DNA/RNA分离提取试剂盒
编号:ALH023
英文名称:Tissue cell DNA/RNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒设计用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,然后裂解混合物DNA/RNA同时通过一个基因组DNA吸附柱,基因组DNA被吸附而RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心后洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上, 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的RNA。无苯酚、氯*(代"仿")DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的RNA/基因组DNA纯度高,互不干扰。得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。
试剂盒特点:
1.完全不使用有毒的苯酚,氯*(代"仿")等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速,简捷,单个样品RNA/基因组DNA分离提取操作一般可在40分钟内完成。
3.试剂盒的独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4. 多次柱漂洗确保RNA/基因组DNA高纯度,可直接用于下游各种实验。
试剂盒组份(50次):
裂解液RLT Plus———————————50ml
去蛋白液RW1—————————————40ml
漂洗液RW——————————————10ml
RNase-free H2O———————————10ml
70%乙醇———————————————9ml RNase-free H2O(第一次使用前按说明加指定量乙醇)
抑制物去除液IR———————————25ml
漂洗液WB——————————————15ml
洗脱缓冲液EB————————————10ml
基因组DNA吸附柱和收集管———————50套
RNA吸附柱和收集管——————————50套
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,超过3×10^6细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如细胞不超过3~4×10^6,组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
5. 关于DNA的微量残留:
一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase 消化也无法做到100%无残留),本公司的组织/细胞RNA/DNA分提试剂盒,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA分离清除技术,绝大多数DNA已经被清除,不需要DNase 消化,可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前,直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
6. RNA纯度及浓度检测:
完整性: RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S和18SrRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。
浓度:取一定量的RNA提取物,用RNase-free水稀释n倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。
储存条件:室温,有效期12个月。
北京石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒品牌关键词:石蜡包埋组织microRNA提取试剂盒,石蜡包埋组织microRNA分离试剂盒,石蜡包埋组织microRNA纯化试剂盒,石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒
·超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
编号:ALH005
英文名称:Ultra Pure Total RNA Extraction Kit From Blood
规格:20次|50次
本试剂盒本试剂盒适用于快速提取全血高纯度总RNA。采用改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA 酶, 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品组分:
组份 | 20次 | 50次 |
10X红细胞裂解液RLB | 10ml | 25ml |
裂解液RL | 25ml | 50ml |
去蛋白液RE | 15ml | 25ml |
漂洗液RW | 5ml | 10ml |
RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
70%乙醇 | 4ml RNase-free H2O | 9ml RNase-free H2O |
吸附柱 | 20个 | 50个 |
收集管(2ml) | 20个 | 50个 |
北京百莱博科技有限公司专业生产RNA纯化产品,欢迎来电咨询选购北京石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒品牌。
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