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-20℃干燥
4年
Poly-L-lysine, Mw 150,000-300,000
598
北京百奥莱博科技有限公司
25988-63-0
25mg
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格是高品质的蛋白质研究,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
名称:北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格
英文名:Poly-L-lysine, Mw 150,000-300,000
CAS:25988-63-0
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本品为多聚-L-赖氨酸(Poly-L-lysine),分子量为150,000-300,000,适用于细胞培养。另外,以氢溴酸(HBr)的形式提供,约1个赖氨酸残基结合1分子的氢溴酸,使其以稳定的结晶固体形式提供,并具有更强的水溶性。用作细胞培养基质,推荐使用量为:对于25cm2的培养板需要0.1mg/ml的聚赖氨酸溶液约0.5ml-1.0ml。
多聚赖氨酸(poly-lysine)是一种带正电荷的氨基酸聚合物,能够结合于DNA,红细胞膜或任何带负电荷蛋白,是一种非特异性的细胞粘附因子,促进细胞吸附到固相基质上。作用机理在于其可增强细胞膜表面的负电荷离子和固相基质表面(如细胞培养皿,载玻片等)的静电相互作用。当吸附到培养表面后,多聚赖氨酸提高用于细胞结合的阳离子结合位点数。多聚赖氨酸分子量的大小与粘度相关,即分子量较低,粘度较低;分子量较高,粘度较高,提供的粘附位点也较多。分子量>30,000的聚赖氨酸适用于促进细胞粘附到固体基质。
多聚赖氨酸(poly-lysine)有两种常见亚型,D-和L-型。由于多聚赖氨酸是细胞结合的非特异性粘附因子,因此两种亚型都可用作包被固体基质,在细胞培养中都可促进细胞的贴壁生长。
中文别名:多聚赖氨酸溶液(L型)
英文别名:Poly-L-lysine Solution; PLL; Poly-L-lysine hydrobromide Solution
CAS:25988-63-0
分子式:L-Lys-(L-Lys)n-L-Lys·xHBr
分子量:150,000-300,000
外观:白色至类白色粉末
溶解性:溶于水(50mg/ml)
储存条件:-20℃干燥,有效期4年
结构式
注意事项
1)注意在细胞培养相关应用中,某些细胞会消化多聚 L-赖氨酸并吸收,摄入过多的多聚 L-赖氨酸会产生一定的细胞毒性。因此,遇到这种情况需选用多聚 D-赖氨酸(Poly-D-lysine),如多聚D-赖氨酸(5 mg/ml),分子量:150,000-300,000,细胞培养级,货号:SY0464。
2)将若想去除本品中的HBr,可将本品溶于中性缓冲液,可透析除去盐离子。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体
编号:SY0638
英文名称:β-Tubulin, Mouse mAb
规格:40μl(>20次)
本品为小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体,小鼠抗β-微管蛋白单克隆抗体。推荐稀释比例:WB(1:10000~20000)。
微管蛋白是一类含有多个成员的蛋白质家族。其最常见的成员是α-微管蛋白和β-微管蛋白,它们是组成微管的主要成分,这两种微管蛋白具有相似的三维结构,能够紧密地结合成二聚体,作为微管组装的亚基。β亚基是由455个氨基酸组成,分子量约为55kDa。本品常作为一种内部参照用于相关免疫学实验。
产品类型:Mouse IgG1 Monoclonal
反应性:人、小鼠、衣藻、果蝇、扁虫、袋鼠、非洲爪蟾蜍
抗原分子量:55kDa
应用:IF, WB, IHC, IP
免疫原:Tubulin, beta (Tubb/TUBB)
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
·p53-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0098
英文名称:p53 luciferase reporter plasmid
规格:1μg
p53荧光素酶报告基因(报告基因质粒)(p53 luciferase reporter plasimd)是用于检测p53转录活性水平为目的的报告基因。p53是一个重要的抗癌基因使癌细胞自杀,防止癌变;还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。
p53报告基因主要应用于以p53为靶点的新型抗肿瘤化合物的筛选以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMp53-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个p53结合位点,可以高灵敏度地检测p53的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得p53报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱
注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用说明
pGMp53-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
储存条件:-20℃。
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·His标签蛋白琼脂糖纯化树脂
编号:SY0392
英文名称:Ni-NTA Agarose Resin
规格:10ml
Ni-NTA Agarose Resin以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,与Ni-IDA树脂相比,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可获取的树脂之一。
基质(Matrix):高度交联的4%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.1MPa, 1bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
储存条件:4℃,有效期2年。
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达的蛋白纯化为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清0.22µm或0.45µm滤膜过滤后置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫酸铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。
3样品纯化
1)装柱:将Ni-NTA Agarose Resin借助重力的作用装入合适的纯化柱中。
2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗色谱柱。
3)平衡:至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。
4)上样:注意控制加样速度,确保目的蛋白与Ni2+充分接触,以提高纯化得率。
【注】:注意收集流出液,用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。
5)平衡/洗杂:Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。注意收集流出液。
【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)洗脱:使用5-10倍柱体积Elution Buffer洗脱,收集洗脱液即目的蛋白溶液。
7)清洗:依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。
【注】:建议在清洗之前用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。
8)保存:5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
(三)填料再生
当填料使用过程中发现反压过高,填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:
1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。
填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。
附表1 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方
缓冲液名称 | 配方 | 配制1L溶液所需各种试剂量 |
Lysis Buffer (pH8.0) | 50mM NaH2PO4 300mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8g NaCl 17.54g Imidazole 0.68g |
Wash Buffer (pH8.0) | 50mM NaH2PO4 300mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8g NaCl 17.54g Imidazole 1.36g |
Elution Buffer(pH8.0) | 50mM NaH2PO4 300mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8g NaCl 17.54g Imidazole 17.0g |
缓冲液名称 | 配方 | 配制1L溶液所需各种试剂量 |
Lysis Buffer (pH8.0) | 8M Urea 100mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌 |
Urea 480.5g NaH2PO4 ·2H2O 15.6g Tris 15.76g |
Wash Buffer (pH6.3) | 8M Urea 100mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3, 0.22µm或0.45µm过滤除菌 |
Urea 480.5g NaH2PO4 ·2H2O 15.6g Tris 15.76g |
Elution Buffer(pH4.50) | 8M Urea 100mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5, 0.22µm或0.45µm过滤除菌 |
Urea 480.5g NaH2PO4 ·2H2O 15.6g Tris 15.76g |
试剂种类 | 浓度 |
还原剂 | 5mM DTE 0.5-1 mM DTT 20mM β-mercaptoethanol 5mM TCEP 10mM reduced glutathione |
变性剂 | 8M urea 6M Gua-HCl |
去污剂 | 2% TritonTM X-100(nonionic) 2% TweenTM20(nonionic) 2% NP-40(nonionic) 2% Cholate (anionic) 1% CHAPS (zwitterionic) |
其他类 | 500mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100mM Na2SO4 1.5M NaCl 1mM EDTA 60mM citrate |
缓冲液 | 50mM sodium phosphate, pH7.4 100mM Tris-HCl, pH7.4 100mM Tris-acetate, pH7.4 100mM HEPES, pH7.4 100mM MOPS, pH7.4 100mM sodium acetate, pH7.4 |
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