【开学促销活动】
西安蓝晓科技NI螯合高流速琼脂糖层析预装柱上市了，预装柱可直接连接AKTA纯化系统使用，对于一般紫外检测，可通过产品随带附件将蠕动泵、紫外检测器连接，方便快捷，现订购，我们还送精美礼品一份，快来选购吧！
镍螯合高流速琼脂糖凝胶产品说明书1、产品介绍：金属镍螯合高流速琼脂糖凝胶是将亚氨基二乙酸基键合在高流速6B琼脂糖凝胶上，再螯合金属离子Ni
2+形成的一种亲和层析介质，利用样品组分中的组氨酸等氨基酸残基与金属离子的亲和吸附进行分离纯化，应用于分离能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。
2、规格： 1ml（预装柱）、5ml（预装柱）
3、性能介绍： | 产品牌号 | 金属螯合高流速琼脂糖凝胶 |
| 配基 | -N（CH2COOH）2 |
| 基质 | Seplite6FF |
| 形状 | 球形 |
| 粒径（μm） | 45~165 |
| 离子结合量 | （Ni2+）（μmol/ml）：20~40 |
| 最高流速（25℃）（cm/h） | ≧370 |
| 耐压（MPa） | 0.3 |
| 耐热 | pH7.0水中120℃20min |
| pH适用范围 | 2~14 （短时间）；3~13（长时间） |
| 化学稳定性 | 以下溶液中稳定：1mol/L NaOH； 0.01mol/L盐酸；20%乙醇。 |
4、使用方法：对于通过AKTA纯化系统纯化，可直接连接预装柱使用：对于一般紫外检测，可通过产品鲁尔接口将蠕动泵
、橡胶管、鲁尔接口、预装柱、紫外检测器连接，操作简单，快捷
。（1）镍螯合高流速琼脂糖凝胶预装柱用2~5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。
（2）建议线性流速为100 cm/h（线性流速=体积流速×60÷柱横截面）。
②上样
（1）样品一般溶解于pH6~8 的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的pH值可以增大载量。
（2）缓冲液中不能含有EDTA和柠檬酸盐，同时最好避免巯基乙醇、DTT等还原剂。
（3）常用缓冲液有10~100 mM磷酸钠缓冲液、20~200 mMTris-HCl缓冲液等。
（4）缓冲液中一般要加入0.15~0.5 M的NaCl以消除离子交换作用。
（5）初次使用镍螯合琼脂糖凝胶时，推荐使用50mM PBS（50 mM NaH
2PO4，0.5 M NaCl,pH 7.4）作为初始缓冲液。
③洗脱
（1）增加咪唑浓度进行洗脱是镍螯合琼脂糖凝胶最常用的洗脱方法。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl调节pH值。
（3）初次使用镍-琼脂糖凝胶FF时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，推荐在初始缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，浓度从低到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
（4）有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。
洗脱方法:
（1）降低pH洗脱：大多数蛋白在pH6~4会被洗脱下来（也可以在pH 3~4），缓冲液可以是醋酸钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
（2）竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度（如0~0.5M咪唑、0~50 mM组氨酸、0~2M NH
4Cl）。梯度洗脱最好在起始缓冲液的恒定pH值下进行。
（3）螯合剂洗脱：EDTA、EGTA 等螯合剂可同金属离子产生作用力，导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白，还会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。
注：降低pH洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落，下次使用前需要重新螯和金属离子。最常用的方法为竞争性洗脱。
上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150 ~500mM的NaCl以消除离子交换作用。
5、再生、清洗、保存：①凝胶再生
（1）多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法：用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗柱子，再用5~10个柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子，最后用2~3个柱体积的0.5 M NaCl洗掉残留的EDTA。
（2）多次使用的柱子脱镍后一般需要进行清洗。清洗方法：用0.1~1.0 M NaOH反向清洗柱子，50 cm/h 保持1~2 h，能去除结合强的杂质，同时也能去除热源。
（3）清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法：用2~5 个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子，用0.1~0.3 M 金属盐溶液过柱5~10个柱体积以螯合金属离子，之后用5~10个柱体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
②在位清洗
（1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：2~3个柱体积的2 M NaCl溶液反向清洗。
（2）去除强疏水性蛋白和脂质等：4个柱体积的70%乙醇或者30% isopropanol 反向清洗。
（3）除去蛋白沉淀、疏水性蛋白：参照凝胶再生步骤。
6、注意事项：（1）使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。
（2）本产品保存条件为20%乙醇，4~8℃。
（3）2-25℃,常压,避光运输。
（4）仅供科研实验使用。
7.常见问题解答 | 出现的问题 | 可能原因 | 解决办法 |
| 流出柱子的液体减少或消失 | 柱子出口关闭或泵不工作
脂蛋白或蛋白聚集物沉淀了
样品过于黏稠
滤膜、接口或管道堵塞
柱子中微生物生长 | 打开出口，检查泵有没有泄露迹象
使用前过滤样品及缓冲液，阻止脂蛋白，避免蛋白聚集
用缓冲液适当对样品进行稀释
检查各环节，如有堵塞进行清除，或更换柱子
分离柱不用时将其保存于20%乙醇溶液中，对其进行在位清洗 |
| 目的蛋白峰不能同其他峰分开 | 样品加载不正确
错误的pH或离子强度的缓冲液
洗脱条件不是最佳
柱子过载
柱子装填柱效差
分离过程由于稳定剂的去除而导致蛋白在柱子中沉淀 | 检查柱床表面及滤膜是否被污染
检查缓冲液的pH及离子强度，保证前一个运行后对柱子进行了再平衡，检查运行条件是否和要求
改变洗脱条件。改用更平缓的梯度，降低流速
减少样品加载量
检查柱效，如有必要更换柱子
调整洗脱液以维持蛋白稳定性。 |
| 蛋白不结合或不按预期洗脱下来 | 蛋白质或脂沉淀在柱子滤膜或柱子里了。
在储存过程中样品发生了改变
蛋白在洗脱液中不稳定或失活
错误的pH或离子强度的缓冲液
蛋白产生集聚并同填料紧密结合
分离柱平衡不完全
| 清洗柱子，检查缓冲液的pH及离子强度。
制备新鲜样品。
确定蛋白质稳定的pH及离子强度
检查缓冲液的pH及离子强度，重新准备缓冲液
进行在位清洗
重复或延长平衡步骤直到pH及电导达平衡水平。 |
| 色谱图峰较小 | 样品在选定波长吸收差 | 如适当检查检测器的吸收范围，如满足要求，使用另一波长检测 |
| 运行中压力升高 | 柱床被压缩
样品浑浊
蛋白产生沉淀 | 重新装柱或使用新柱
增加样品溶解性，使用前进行膜过滤
提前除去脂蛋白 |
| 柱床有气泡 | 缓冲液或样品未进行脱气
环境温度发生改变 | 彻底脱气
缓冲液若在冰箱保存使用前需是温度达到恒定室温
柱子避免加热升温 |
| 柱床有裂缝 | 大体积气体渗漏柱中 | 检查连接点是否有泄露，或更换柱子 |
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