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    ATX2 脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体

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    ATX2 脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体
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      • 货号:

        ZY-3048R

      • 抗体名:

        ATX2 脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体

      • 抗体英文名:

        ATX2 脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体

      • 靶点:

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      • 浓度:

        1mg/ml

      • 应用范围:

        科研使用

      • 宿主:

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      • 适应物种:

        人,大鼠,小鼠,兔

      • 克隆性:

        单克隆

      • 保存条件:

        -20℃

      • 形态:

        液态/粉状

      • 亚型:

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      • 免疫原:

        来电咨询

      • 规格:

        0.1ml/0.2ml

      上海泽叶生物科技有限公司专注高品质的免疫学产品并代理:sigmaR&D,BD,CST,abcam,eBioscince,santa,PeproTech,BioVision,Mabtech,Bethyl Biolegend , DB Biotech,American Research, Rockland, Fitzgerald等知名品牌的产品提供针对人源,大鼠,小鼠等种属蛋白的多种单抗及多抗产品,可以应用于多种实验。
      一,动物的免疫
      选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb至关重要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫,免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
        1. 颗粒性抗原免疫性较强,不加佐剂就可获得很好的免疫效果。下面以细胞性抗原为例的免疫方案:
        2. 可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂,常用佐剂:福氏完全佐剂,福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状,放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇,使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
            初次免疫  Ag 1~50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射
              │     (一般0.8~1ml 0.2ml/点)
              ↓3周后
            第二次免疫 剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip
              │       (ip剂量不宜超过0.5ml)
              ↓3周后
             第三次免疫 剂量同上,不加佐剂,ip
              │ (5~7天后采血测其效价,检测免疫效果)
              ↓2~3周后
            加强免疫,剂量50~500μg为宜,ip或iv
              ↓3天后
             取脾融合
        目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新,如①将可溶性抗原颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂,提高机体的免疫应答水平,促进免疫细胞对抗原反应性。
      二,融合与筛选
      最重要的一步是融合,我想这也是单抗制备过程中最难的一步了。
       (一) 细胞融合流程
        1 取对数生长的骨髓瘤细胞SP2/0,1000rpm离心5分钟,弃上清,用不完全培养液混悬细胞后计数,取所需的细胞数,用不完全培养液洗涤2次。
        2 同时制备免疫脾细胞悬液,用不完全培养液洗涤2次。
        3 将骨髓瘤细胞与脾细胞按1∶10或1∶5的比例混合在一起,在50ml塑料离心管内用不完全培养液洗1次,1200rpm,8分钟。
        4 弃上清,用滴管吸净残留液体,以免影响PEG的浓度。
        5 轻轻弹击离心管底,使细胞沉淀略加松动。
        6 在室温下融合:
      ①30秒内加入预热的1ml45%PEG(Merek,分子量4000)含5%DMSO,边加边搅拌。
        ② 作用90秒钟,若冬天室温较低时可延长至120秒钟。
        ③ 加预热的不完全培养液,终止PEG作用,每隔2分钟分别加入1ml,2ml,3ml,4ml,5ml和10ml。
        7 离心,800rpm,6分钟。
        8 弃上清,先用6ml左右20%小牛血清RPMI1640轻轻混悬,切记不能用力吹打,以免使融合在一起的细胞散开。
        9 根据所用96孔培养板的数量,补加完全培养液,10ml一块96孔板。
        10 将融合后细胞悬液加入含有饲养细胞的96孔板,100μl/孔,37℃、5%CO2孵箱培养。
        一般一块96孔板含有1×107脾细胞。
      三、抗体的鉴定
      筛选杂交瘤细胞通过选择性培养而获得杂交细胞系中,仅少数能分泌针对免疫原的特异性抗体。一般在杂交瘤细胞布满孔底1/10面积时,即可开始检测特异性抗体,筛选出所需要的杂交瘤细胞系。 
       检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同,选择不同的筛选方法,一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。
        常用的方法有:
        1. ELISA用于可溶性抗原(蛋白质)、细胞和病毒等McAb的检测。
        2. RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。
        3. FACS(荧光激活细胞分类仪)用于检查细胞表面抗原的McAb检测。
        4. IFA用于细胞和病毒McAb的检测。
      可靠的筛选方法必须在融合前建立,避免由于方法不当贻误整个筛选时机。
      四、性质检测
      对制备的McAb进行系统的鉴定是十分必要的。应对其做如下方面的鉴定:
       1. 抗体特异性的鉴定:除用免疫原(抗原)进行抗体的检测外,还应用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验,方法可用ELISA、IFA法。例如①制备抗黑色素瘤细胞的McAb,除用黑色素瘤细胞反应外,还应用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应,以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。② 制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体,应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应,其次是与其它细胞因子间有无交叉。

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