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慢病毒载体构建与包装

慢病毒载体构建与包装
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供应商信息

湖南艾佳生物科技股份有限公司
商家诚信度:
成立时间:2011
入驻丁香通年限:5年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:52%
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产品详情

简介: 慢病毒载体构建与包装
提供商: 湖南艾佳生物科技股份有限公司
服务名称: 慢病毒载体构建与包装
地区: 长沙
规格: ≥1×108TU/ml

慢病毒载体构建与包装

慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或siRNA)导入宿主的染
色体上,实现持久性表达目的序列的目的。慢病毒载体能够有效地感染包括神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细
胞等在内的几乎所有的哺乳动物细胞,并且感染效率非常高,是传统方法的数倍甚至数十倍,目前已经被科研工作者广泛使用。

服务内容
1、shRNA慢病毒包装流程

序号 内容描述 周期 价格
1 根据客户提供靶基因信息,设计合成siRNA 1周 询价
2 有效siRNA筛选(保证至少一条有效) 1-2周 询价
3 shRNA慢病毒载体构建 3周 询价
4 慢病毒包装、出毒、滴度检测 4周 询价
 

2、过表达慢病毒包装流程

序号 内容描述 周期 价格
1 目的基因扩增 1周 询价
2 目的基因慢病毒载体构建 2-3周 询价
3 慢病毒包装、出毒、滴度检测 4周 询价

客户须知

1、客户提供目的基因、表达载体,或从本公司AuraClone基因库中选择购买;
2、客户选择载体框架信息,确保载体满足客户后续实验要求。

客户所得
1、慢病毒,滴度≥1×108TU/ml
2、病毒感染细胞图片;
3、实验报告。

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慢病毒载体构建及包装 促销中 咨询价格更优惠 中洪博元      慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 中洪服务项目      中洪博元生物提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。      中洪博元公司的慢病毒产品主要为第四代质粒系统,其特点为高表达,高低度,快速克隆和易检测。慢病毒滴度可达到1E+8 TU/mL,不必浓缩和纯化,就能感染目的细胞并且通过GFP发出的绿色荧光来筛选,可以不同实验者的实验需求,使后续的实验更加方便快捷。整体实验流程 (一) 实验流程(1、2、3为并列步骤)       1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。      2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。      3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。      4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。 本公司慢病毒滴度检测情况中洪博元网址:www.chinazglab.com
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)来源的一种病毒载体,慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息,是慢病毒载体系统的主要组成部分。慢病毒载体可以将外源基因或shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或shRNA的转导效率,且目的基因或shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或shRNA的长期、稳定表达。服务内容和流程过表达慢病毒载体构建 1. 根据目的基因序列信息设计载体构建方案,外源导入基因应≤3kb; 2. 设计合成引物,扩增目的基因片段; 3. 构建重组表达穿梭载体,酶切、PCR、测序验证载体序列正确; 4. 通过脂质体转染细胞,实时荧光定量PCR检测外源基因表达,验证载体表达有效; 5. 293T包装系统进行慢病毒包装、生产、收集病毒液; 6. 浓缩、纯化病毒液,滴度测定; 7. 交付实验报告,快递寄送病毒产品。 shRNA慢病毒载体构建 1. 根据目的基因序列信息,设计合成3条siRNA和1条阴性对照RNA; 2. 干扰靶点筛选:将siRNA转染细胞,通过RT-qPCR检测目的基因的mRNA表达量,筛选出沉默效果最好的1条siRNA; 3. 根据筛选到的siRNA靶点序列设计合成shRNA,构建到shRNA慢病毒穿梭载体上,测序验证载体序列正确; 4. 通过脂质体转染细胞,实时荧光定量PCR检测目的基因表达,验证基因沉默有效; 5. 293T包装系统进行慢病毒包装、生产、收集病毒液; 6. 浓缩、纯化病毒液,滴度测定; 7. 交付实验报告,快递寄送病毒产品。客户提供  靶基因信息。赛哲生物提供 1. 慢病毒包装的实验报告单,含实验材料方法和结果; 2. 提供108TU/ml病毒(1ml)和对照病毒。 
慢病毒|慢病毒包装-专业慢病毒服务 产品介绍       慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 中洪服务项目      中洪博元生物提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。      中洪博元公司的慢病毒产品主要为第四代质粒系统,其特点为高表达,高低度,快速克隆和易检测。慢病毒滴度可达到1E+8 TU/mL,不必浓缩和纯化,就能感染目的细胞并且通过GFP发出的绿色荧光来筛选,可以不同实验者的实验需求,使后续的实验更加方便快捷。整体实验流程 (一) 实验流程(1、2、3为并列步骤)       1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。      2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。      3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。      4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。 本公司慢病毒滴度检测情况中洪博元网址:www.chinazglab.com  欢迎咨询:15979190352 
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