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CRISPR/Cas9细胞株基因敲除细胞株构建

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CRISPR/Cas9细胞株基因敲除细胞株构建
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  • 丰富的敲除经验,CRISPR/Cas9敲除系统
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  • 南京市汉中门大街301号,01栋13层A座

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  • 提供商: Genloci
    服务名称: 敲除细胞株构建
    规格: 细胞株
    概述
    CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,此系统成功被改造为第三代人工核酸内切酶,可用于各种复杂基因组的编辑。基因修饰类型包括基因定点突变、基因定点整合、多位点突变和小片段的缺失。其突变效率高、制作简单,成本低,已经被广泛的应用于基因编辑的研究。目前 CRISPR/Cas9 技术成功应用于人类细胞、斑马鱼和小鼠以及细菌的基因组精确修饰,应用最多的领域是基因敲除株系构建和基因敲除动物的研究。


    实验流程
    吉锐生物拥有完善的 CRISPR/Cas9 载体系统,包括单敲除,双敲除,缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系。并且每一个载体系统都有不同的标签(EGFP/RFP/Puro/Neo)可供选择。同时,拥有 100 余种基因敲除的项目经验,可以快速、准确、高效的完成任何一个基因敲除的项目。
    基因敲除细胞株构建(GS161)

    实验流程

    实验案例
    1、设计针对 Atg10 基因的 gRNA 并克隆到吉锐生物的 pGK1.1 敲除载体中;
    2、电转 pGK1.1(Atg10)载体至 K562 细胞中;
    3、Cruiser
    ® 酶切计算突变率(图1);
    4、单克隆筛选用 Cruiser
    ® 酶切验证获得潜在阳性克隆(图2);
    5、对潜在的阳性克隆进行测序验证,获得纯合子;
    6、Atg10敲除的株系进行 Western Blot 验证(图3);
     

    ↑↑ 图1. Cruiser®酶切细胞池,计算突变率。


    图2. Cruiser®筛选单克隆细胞,获得潜在的阳性克隆。


    图3. WB验证敲除后的株系蛋白表达情况
     

     

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