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9002S, SimpleCh
IP®️ Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads)参见网站
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赛信通（上海）生物试剂有限公司暨美国CST中国分公司
单克隆
1 Kit
| 产品包括 | 容量（计数） | 保存温度 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Glycine Solution (10X) | 1 x 100 ml | 4°C | |||
| Buffer A (4X) | 1 x 25 ml | 4°C | |||
| Buffer B (4X) | 1 x 25 ml | 4°C | |||
| ChIP Buffer (10X) | 1 x 20 ml | 4°C | |||
| ChIP Elution Buffer (2X) | 1 x 7 ml | 4°C | |||
| 5 M NaCl | 1 x 3 ml | 4°C | |||
| 0.5 M EDTA, pH 8.0 7011 | 1 x 1 ml | 4°C | |||
| ChIP-Grade Protein G Agarose Beads 9007 | 1 x 1 ml | 4°C | |||
| DNA Binding Buffer | 1 x 30 ml | RT | |||
| DNA Wash Buffer (add 4x volume ethanol before use) | 1 x 6 ml | RT | |||
| DNA Elution Buffer | 2 x 1 ml | RT | |||
| DNA Purification Columns and Collection Tubes | 1 x 36 包 | RT | |||
| Protease Inhibitor Cocktail (200X) | 1 x 750 µl | -20°C | |||
| RNAse A (10 mg/ml) | 1 x 50 µl | -20°C | |||
| Micrococcal Nuclease 10011 | 1 x 60 µl | -20°C | |||
| Proteinase K (20mg/ml) | 1 x 100 µl | -20°C | |||
| SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers 7014 | 1 x 150 µl | -20°C | |||
| SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers 7015 | 1 x 150 µl | -20°C | |||
| Histone H3 (D2B12) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulated) 4620 | 1 x 100 µl | -20°C | |||
| Normal Rabbit IgG 2729 | 1 x 50 µl | -20°C | |||
| DTT (Dithiothreitol) 7016 | 1 x 192.8 mg | 4°C |
SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads) #9002 包含进行多达 6 次染色质制备和 30 次染色质免疫沉淀所必需的缓冲液和试剂，优化后每次实验使用 4 X 106 个细胞。一次完整的检测可在短达两天内进行，并且使用更多或更少的细胞时可轻松扩增或缩减。
细胞用甲醛固定后裂解，染色质与 Micrococcal Nuclease 部分酶切形成片段，从而获得 1-5 个核小体的染色质片段。染色质的酶解较超声处理更为温和，可避免因超声处理期间不同的超声处理功率和染色质乳化而引发的问题，因为这些因素会因蛋白变性和降解而导致染色质碎裂不完全或抗体表位缺失。使用经 ChIP 的验证的抗体和 ChIP-Grade Protein G Agarose Beads 进行染色质免疫沉淀。在蛋白质-DNA 解交联后，DNA 使用 DNA 纯化离心柱进行纯化，以便简单快速地回收 DNA 并去除蛋白污染物，无需进行苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。免疫沉淀期间，特定 DNA 序列的富集度可使用标准 PCR、实时定量 PCR 等各种方法进行分析。请注意，该试剂盒不适合用于 ChIP-seq，因为ChIP-Grade Protein G Agarose Beads 已使用经超声处理的鲑精 DNA 封闭，因此会干扰下游测序。
SimpleChIP® Kit 还提供确保 ChIP 实验成功的重要对照物。该试剂盒包含对人和小鼠核糖体蛋白 L30 (RPL30) 基因进行 PCR 检测所需的阳性对照 Histone H3 Antibody、阴性对照 Normal Rabbit IgG Antibody 和引物组。组蛋白 H3 是染色质的一种核心组分，能在基因组内结合多数 DNA 序列，包括 RPL30 基因座。由于几乎所有被检测基因座上富含Histone H3，因此，Histone H3 Antibody 可用作通用阳性对照。
SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit 可与所有经 ChIP 验证的抗体一同用来检测哺乳动物细胞中内源水平的蛋白-DNA 相互作用以及组蛋白修饰（见图 2 和 3）。阳性对照 Histone H3 Antibody 可识别许多不同物种中高度保守的组蛋白 H3，包括人、小鼠、大鼠和猴。用于人和小鼠阳性对照 RPL30 基因座的引物组也包括在内，但该试剂盒用于检测其他物种时需要设计额外的对照引物组。
染色质免疫沉淀 (ChIP) 测定法是一种用于在细胞天然染色质背景下探测蛋白质-DNA 相互作用的强大的通用技术 (1,2)。这种测定法用于检测与基因组某个特定区域有关的多种蛋白，或相反，用于检测某种特殊蛋白结合的基因组的多个区域 (3-6)。它可用于确定各种蛋白被募集到某个基因启动子上的特定顺序，或用于“测定”整个基因位点上某种特定组蛋白修饰的相对数量 (3,4)。除了组蛋白外，ChIP 测定法还可用于分析转录因子与辅助因子、DNA 复制因子和 DNA 修复蛋白的结合。进行 ChIP 检测时，细胞或组织首先用甲醛固定，甲醛是一种可逆的蛋白-DNA 交联剂，可“维持”细胞中发生的蛋白-DNA 相互作用 (1,2)。细胞进行裂解，染色质采集后使用超声处理或酶消化法进行碎裂。染色质随后使用对某种特殊蛋白或组蛋白修饰具有特异性的抗体进行免疫沉淀。任何与目标蛋白或组蛋白修饰有关的 DNA 序列都会作为交联染色质复合体的一部分进行共沉淀，并且该 DNA 序列的相对数量会在免疫选择过程中达到富集。免疫沉淀后，蛋白质-DNA 交联被逆转，DNA 得以纯化。标准 PCR 或定量实时 PCR 用于测量通过蛋白特异性免疫沉淀达到富集的某种特定 DNA 序列的数量 (1,2)。或者，ChIP 测定法还可与基因组微芯片（芯片上的 ChIP）技术、高通测序或克隆策略联合使用，它们都能对蛋白-DNA 相互作用和组蛋白修饰进行全基因组分析 (5-8)。
| 货号 | 产品名称 | 应用 |
| 56383S | SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit（超声法，磁珠） | ChIP ChIP-seq |
| 9005S | SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)（酶解法，磁珠） | ChIP ChIP-seq |
| 9004S | SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads)（酶解法，琼脂糖微珠） | ChIP |
| 9003S | SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)（酶解法，磁珠） | ChIP ChIP-seq |
| 9002S | SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Agarose Beads)（酶解法，琼脂糖微珠） | ChIP |
| 56795S | SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina®（DNA 文库构建） | ChIP-seq |
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SimpleChIP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
Illumina 是 Illumina, Inc 的注册商标。
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