QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有为逆转录和PCR反应特别设计的酶。独特组合的Omniscript和Sensiscrip逆转录酶对RNA模板有高度亲和性,确保RNA逆转录的灵敏度达到1 pg到2 µg。逆转录完成后,升温至95°C,15分钟,活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。这种方法可减少引物二聚体等非特异性扩增产物的生成,并减少背景的影响,确保RT-PCR的高灵敏度和可重复性。
退火温度范围宽
引物的最佳退火温度取决于碱基对的组成(如A、T、G、C核苷酸的比例)、引物的浓度和反应的离子环境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+,使用该缓冲液可在很宽的温度范围内增加特异性PCR产物的产量(参见"Increased specific primer annealing")。其原理是破坏非特异性结合的引物对,提供更加可靠的反应环境,减少繁琐的温度优化过程。相反,如使用仅含K+的PCR或一步式RT-PCR缓冲液,PCR最佳退火温度的范围较窄,可靠性较差。