●产品说明 1.本产品是采用探针法(TaqMan®,Molecular Beacon等)进行Real Time PCR的专用试剂。是一种2×浓度的荧光定量MIX试剂,进行实验时,Real Time PCR反应液的配制十分方便简单。
2.产品中的DNA聚合酶使用了公司精心研制的化学修饰法热启动Taq酶,与经过反复优化的Real Time PCR用Buffer组合使用,可以有效抑制非特异性的PCR扩增,显著提高PCR的扩增效率,进行高灵敏度、高特异性的Real Time PCR扩增反应。
3.本产品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,定量数据重复性好,精确度高。
4.采用嵌合荧光法(SYBR® Green 染料法)进行Real Time PCR实验时,建议使用Bestar qPCR Master Mix(SYBR GREEN 染料法) (Code:DBI -2043)。
●储存条件 -20°C长期保存;如果频繁使用,建议储存于4°C。
●试剂盒特点 1、适用于各种Real Time PCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定性、定量检测。
2、是一种2×浓度的荧光定量MIX试剂,PCR反应液配制时,只需加入模板、上下游引物、荧光探针、灭菌蒸馏水便可进行Real Time PCR反应,操作简单方便。
3、DNA聚合酶使用经过化学修饰型Bestar Taq DNA Polymerase,可以进行Hot Start法PCR反应(极大的防止副反应的发生),再与公司精心优化的Buffer溶液结合使用,具有高扩增效率、高扩增灵敏度、高扩增特异性的特点。
4、95℃ 2min完全热启动,完全避免了非特异性反应的发生;
●Real Time PCR操作顺序 1.溶解试剂,上下颠倒混匀,确认反应溶液完全溶解。 (避免使用振荡器混匀,剧烈振荡会降低制品性能)。
2.配制PCR反应用混合液,分装至PCR反应管中。
3.添加PCR扩增用模板。
4.使用Real Time PCR扩增仪,进行PCR扩增反应。
注)反应液配制方法和PCR扩增条件请参照使用方法。
Real Time PCR仪的使用方法,请参照各种仪器说明书。
请按照推荐的实验方法进行Hot Start法PCR扩增。
●注意事项 1. 使用的探针浓度,与使用的Real Time PCR扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行。 2. 在20ul反应体系中,DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定最佳的DNA模板添加量。 3. 如果欲使用本产品进行2 Step RT-PCR反应的第二步PCR扩增反应,第一步的RT反应液作为DNA模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10%。 4. 96孔板、Single-Tube、8联Tube采用50ul反应体系,384孔板、96-well Fast Thermal Cycling plate采用20ul反应体系。 ●其他说明 详细参见产品说明书