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    原位杂交;实验外包;FISH检测;探针合成;

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      • 提供商:

        上海歌凡生物科技有限公司

      • 服务名称:

        原位杂交

      • 规格:

        700元/标本/指标


           客户提供探针或者探针碱基序列,我公司可以代为合成。标本的固定、包埋要严格按照原位杂交的要求进行,以防止RNA降解。实验周期1-2周。我公司提供多项探针检测技术,如有需求请电话联系我公司技术支持。公司拥有独立实验室,欢迎来公司参与整个实验过程。标本的固定、包埋详情请来电咨询。
       
      FISH(DNA水平) 700元/标本/指标 CISH(DNA水平) 700元/标本/指标
      FISH(RNA水平) 700元/标本/指标 CISH(RNA水平) 700元/标本/指标
      FISH(miRNA水平) 700元/标本/指标 CISH(miRNA水平) 700元/标本/指标

      FISH实验流程:
      1.常规脱蜡至水洗;
      2.制作湿盒:用5×SSC(35ml)+甲酰胺(35ml)置于湿盒内。
      3.30%H2O21份+9份纯甲醇混合液室温处理10min。DEPC水洗3次,每次1min;
      4.切片置于湿盒内,用0.2mol/L盐酸滴于组织上,常温15min,用DEPC水洗2次,每次1min(盐酸可中和带电荷的碱性蛋白,降低背景)
      5.蛋白酶K覆盖组织,分子杂交仪中37℃20min。蛋白酶K可以消化和暴露被遮蔽的靶核酸,增加探针的结合效率。
      6.用0.2%或0.1mol/L甘氨酸洗液洗1min(现用现配),终止蛋白酶K。
      7.PBS洗两次,每次一分钟。
      8.用4%PFA多聚甲醛固定组织10min。
      9.PBS洗三次,每次1min。
      10.用acetic anhydride乙酸酐ph=8.0(乙酰化作用,降低背景)室温洗5min,2次。
      11.用PBS洗5次,每次1min。
      12.用5×SSCph=7.5洗两次,每次1min。
      13.切片放置湿盒内,用预杂交液 覆盖组织,65℃预杂交 1h。
      14.500ng/ml  digoxigenin-labeled pube 探针覆盖切片,在杂交仪内62-70℃黑暗反应24~72h,反应温度与反应时间视不同的组织与探针而定,建议一般65℃48h。
      15.用2×SSC ph=7.5,室温洗1次,1min。
      16.用甲酰胺 加4×SSC ph=4.5 1:1混合液在60℃或65℃洗三次,每次20min。
      17.用PBS洗5次,每次1min,室温。
      18.将切片置于湿盒内,用封闭液覆盖切片,室温反应至少30min。
      19.滴加生物素化鼠抗Dig抗体,37℃60min反应。
      20.用Tris/NaCl buffer洗5-7次,每次1min,室温
      21.用NTM buffer 洗2-3次,每次1min,室温
      22.在湿盒内,用NBT/BCIP200ul+4ul染色液覆盖组织,室温反应24h,避光
      23.用PBS洗2次,每次1min,室温
      24.封片:   将组织切片依次放入蒸馏水(20s),70%酒精(20s),90%酒精(20s),100%酒精(20s),二甲苯(10min),二甲苯(10min)。同时,准备盖玻片(用擦镜纸擦净)
      25.取出切片,擦干后滴一滴树脂胶,盖上盖玻片。
      我们提供:
        1. 提供完成实验的玻片;
        2. 每张切片提供1张合适视野的照片;
        3. 提供具体的实验方法、步骤、所用试剂、仪器、及相关分析数据等,实验结果将以电子或书面形式提交给您。
      结果示意图:
        
       服务周期:
       一周以内
       温馨提醒:
            提供实验必要的信息,例如组织来源、实验目的和拍照要求
       
       


       

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    上海歌凡生物科技有限公司

    • 联系人:

      余小姐

    • 所在地区:

      上海市沪太路3100号尚大国际C座301室

    • 业务范围:

      技术服务,书籍 / 软件,耗材,细胞库 / 细胞培养,论文服务,试剂,原辅料包材,医疗器械,实验室仪器 / 设备

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