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    • ¥300 - 700
    • 利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待 测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。 用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高,可以通过延长曝光时间加强信号强度,比较灵敏。
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      • 提供商:

        上海歌凡生物科技有限公司

      • 服务名称:

        FISH检测、CISH检测、原位杂交、原位杂交检测

      客户提供探针或者探针碱基序列,我公司可以代为合成。标本的固定、包埋要严格按照原位杂交的要求进行,以防止RNA降解。实验周期1-2周。实验结束我公司提供详细实验流程、载玻片和探针。标本的固定、包埋详情请来电咨询。
      FISH实验流程:
      1. 常规脱蜡至水洗;
      2.       制作湿盒:用5×SSC(35ml)+ ***(35ml)置于湿盒内。
      3.       30%H2O21份+9份纯 **混合液室温处理10min。DEPC水洗3次,每次1min;
      4.       切片置于湿盒内,用0.2mol/L盐酸滴于组织上,常温15min,用DEPC水洗2次,每次1min(盐酸可中和带电荷的碱性蛋白,降低背景)
      5.       蛋白酶K覆盖组织,分子杂交仪中37℃20min。蛋白酶K可以消化和暴露被遮蔽的靶核酸,增加探针的结合效率。
      6.       用0.2%或0.1mol/L甘氨酸洗液洗1min(现用现配),终止蛋白酶K。
      7.       PBS洗两次,每次一分钟。
      8.       用4%PFA ****固定组织10min。
      9.       PBS洗三次,每次1min。
      10.   用acetic anhydride ***ph=8.0(    **化作用,降低背景)室温洗5min,2次。
      11.   用PBS洗5次,每次1min。
      12.   用5×SSCph=7.5洗两次,每次1min。
      13.   切片放置湿盒内,用预杂交液 覆盖组织,65℃预杂交 1h。
      14.   500ng/ml  digoxigenin-labeled pube 探针覆盖切片,在杂交仪内62-70℃黑暗反应24~72h,反应温度与反应时间视不同的组织与探针而定,建议一般65℃48h。
      15.   用2×SSC ph=7.5,室温洗1次,1min。
      16.   用甲酰胺 加4×SSC ph=4.5 1:1混合液在60℃或65℃洗三次,每次20min。
      17.   用PBS洗5次,每次1min,室温。
      18.   将切片置于湿盒内,用封闭液覆盖切片,室温反应至少30min。
      19.   滴加生物素化鼠抗Dig抗体,37℃60min反应,
      1. 用Tris/NaCl buffer洗5-7次,每次1min,室温
      2. 用NTM buffer 洗2-3次,每次1min,室温
      3. 在湿盒内,用NBT/BCIP200ul+4ul染色液覆盖组织,室温反应24h,避光
      4. 用PBS洗2次,每次1min,室温
      5. 封片:
         将组织切片依次放入蒸馏水(20s),70%酒精(20s),90%酒精(20s),100%酒精(20s),二 **(10min),二 **(10min)。同时,准备盖玻片(用擦镜纸擦净)
      1. 取出切片,擦干后滴一滴树脂胶,盖上盖玻片。
      我们提供:
        1. 提供完成实验的玻片
        2. 每张切片提供1张合适视野的照片
        3. 提供具体的实验方法、步骤、所用试剂、仪器、及相关分析数据等,实验结果将以电子或书面形式提交给您
      结果示意图:
        
       服务周期:
       一周以内
       温馨提醒:
            提供实验必要的信息,例如组织来源、实验目的和拍照要求
       
       
       

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      技术服务,书籍 / 软件,耗材,细胞库 / 细胞培养,论文服务,试剂,原辅料包材,医疗器械,实验室仪器 / 设备

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