Pull down MS实验技术服务—GST pulldow

Pull down技术原理—辉骏生物

     Pull down技术是体外条件下研究蛋白质相互作用的方法。先将体外表达的GST标签或His标签融合蛋白结合到亲和树脂上，再将结合了GST/His-靶蛋白的树脂与样本裂解液孵育，这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从树脂洗脱下来，即pull down产物。最后，质谱鉴定出复合物中的未知蛋白。

Pull down实验流程—辉骏生物

GST Pull down实验流程图

Pull down 实验设计—辉骏生物
1. 带GST或His标签的诱饵蛋白原核表达载体转化大肠杆菌，表达诱饵蛋白（这一步比较关键，很多蛋白原核表达会形成包涵体，极大影响后续实验，我们采用自诱导培养基培养细菌，使得包涵体形成的几率大大降低）；
2. 带标签的诱饵蛋白被标签亲和纯化树脂捕获；
3. 加入待测样本裂解液孵育，与诱饵蛋白互作的蛋白即可被吸附；
5.清洗，离心，去除未结合的杂蛋白；
6.洗脱，得到诱饵蛋白及其互作蛋白的复合物；
7. 对蛋白复合物进行LC-MS/MS检测。

Pull down结果示例—辉骏生物

GST pull down MS 诱饵蛋白WB检测图

GST pull down MS 质谱检测结果

生物信息学分析结果

Pull down服务内容—辉骏生物

原核表达与蛋白纯化；

pull down捕获互作蛋白；

LC-MS/MS鉴定；

数据检索、生物信息学分析；

结果提交。

Pull down实验订购须知—辉骏生物

技术服务咨询：在您开始实验之前，本公司将为竭诚您提供给类科学、严谨的pull down实验设计方案。

为了保证pull down实验能顺利进行，客户应提供正确的目的蛋白序列或者基因登录号、拟用标签。